猪伪狂犬病病毒gD和gE蛋白间接ELISA检测方法的建立及联合应用

来源：家畜生态学报杂志2022年第11期北京时间：

作者：林东文,王宝琴,张艳,刘博,王文秀

单位：1.福建省龙岩市新罗区农业农村局,福建 龙岩 364000;2.滨州学院 生物与环境工程学院, 山东 滨州 256600;3. 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室, 海南 海口 571100;4.山东省滨州畜牧兽医研究院,山东 滨州 256600

摘要：为建立一种能够快速鉴别检测猪伪狂犬病毒（PRV）疫苗免疫抗体和野毒抗体的方法，分别对PRV的gD蛋白和gE蛋白进行原核表达，以其重组蛋白作为检测抗原分别建立了gD间接ELISA方法和gE间接ELISA方法，并联合应用两种检测方法对临床血清样品进行检测。结果表明：获得了以包涵体形式表达的重组gD蛋白和重组gE蛋白，经Western blot检测表明两种重组蛋白均具有良好的免疫学活性；gD间接ELISA方法和gE间接ELISA方法检测PRV阳性血清的最低检出效价分别为1:25 600和1:12 800，gD间接ELISA方法检测PRRSV、CSFV、PPV、PCV2、PEDV、TGEV阳性血清均为阴性；gE间接ELISA方法检测PRV疫苗免疫血清以及PRRSV、CSFV、PPV、PCV2、PEDV、TGEV阳性血清均为阴性；建立的gD 和gE 蛋白的两种间接ELISA方法的批内和批间重复性试验的变异系数分别小于5%和7%；联合应用gD间接ELISA方法和gE间接ELISA方法检测2156份临床血清样品，PRV抗体阳性率为88.96%，PRV野毒抗体阳性率为4.04%，PRV免疫抗体阳性率为84.93%。说明建立的gD间接ELISA方法和gE间接ELISA方法均具有良好的敏感性、特异性、重复性，两种方法的联合应用实现了PRV免疫抗体和野毒抗体的鉴别检测。

关键词：猪伪狂犬病；间接ELISA；野毒抗体；免疫抗体

基金资助：山东省外专双百计划项目（WST2018014）; 海南省家畜家禽工程技术研究中心开放课题资助项目（HLP201801）