鸡gga-miR-199a慢病毒表达系统的构建

来源：家畜生态学报杂志2023年第2期北京时间：

作者：董小琳,任远明,薛剑楠,王方,魏泽辉

单位：1. 西北农林科技大学 动物科技学院，陕西 杨凌 712100；2. 陕西省镇坪县畜牧兽医中心，陕西 镇坪 725600

摘要：为建立一种稳定持续表达鸡gga-miR-199a的系统，将从鸡DF-1细胞扩增到的gga-miR-199a前体序列克隆入pLL3.7慢病毒载体质粒中用以包装慢病毒。同时构建了更换pLL3.7质粒中鼠源U6启动子更换为鸡源及人源U6启动子的pLL3.7慢病毒载体质粒；将其与慢病毒包装辅助质粒共转至HEK293T细胞中，收集浓缩病毒颗粒并侵染细胞并获得过表达gga-miR-199a的单细胞克隆。提取单细胞克隆总RNA进行gga-miR-199a-5P的定量检测。结果表明，经慢病毒侵染后的细胞中鸡gga-miR-199a表达量显著提高，且人源U6启动子的转录效率最高，该研究成功建立了一种稳定持续表达鸡gga-miR-199a的慢病毒系统，说明该系统有利于在鸡活体或原代细胞中开展miRNA功能的研究。

关键词：鸡；gga-miR-199a；慢病毒；过表达

基金资助：陕西省重点研发计划（2019NY-084）