不同转染方法应用于体细胞转基因效率的研究

来源：家畜生态学报杂志2024年第2期北京时间：

作者：赵广伟,杨小玲,张孟奇,苏勤智,陈凤

单位：1. 河南牧业经济学院 动物科技学院，河南 郑州 450046；2. 中山大学附属第七医院 消化医学中心，广东 深圳518107

摘要：试验旨在比较不同转染方法介导绿色荧光蛋白（EGFP）基因转染猪不同体细胞的效果。原代分离培养来源于猪脂肪和骨髓的两种间充质干细及成纤维细胞，含有EGFP的质粒分别通过脂质体、罗氏转染试剂和电穿孔法转入猪3种体细胞中，使用倒置荧光显微镜观察EGFP的表达，并通过血细胞计数法分析细胞相对存活率，流式细胞仪检测细胞转染效率。结果表明，3种方法转染不同体细胞48 h均有绿色荧光蛋白的表达。在不同方法转染相同体细胞的比较中，细胞存活率从高到低依次为罗氏转染试剂>脂质体>电穿孔法，罗氏转染试剂和脂质体转染后的细胞存活率显著高于电穿孔法（P罗氏转染试剂>脂质体，电穿孔法的转染效率明显高于罗氏和脂质体转染试剂，同时罗氏转染试剂的转染效率显著高于脂质体（P0.05），电穿孔法转染间充质干细胞的效率均显著高于成纤维细胞（P0.05）。3种方法均可用于转染猪体细胞，综合考虑转染效率和细胞存活率，电穿孔法的转染效果最好，可用于转染细胞状态较佳的细胞，其次为罗氏转染试剂。

关键词：电穿孔法；脂质体；罗氏转染试剂；体细胞；转染效率；细胞存活率

基金资助：河南牧业经济学院博士科研启动基金项目（24030028）