ASFV p30蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与分析软件开发应用

来源：家畜生态学报杂志2026年第4期北京时间：

作者：朱恒志,张冯禧,李娜,赖虹桥,李子轩,宋京泽,解建平,温立斌,何孔旺,马清霞,肖琦

单位：1. 江苏省农业科学院 兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室/江苏省食品质量安全重点实验室（省部共建国家重点实验室培育基地），江苏 南京 210014；2. 青岛农业大学 动物医学院，山东 青岛 266109；3. 西藏农牧大学 动物科学学院，西藏 林芝 860000；4. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 2250095. 兽用生物制品（泰州）国泰技术创新中心，江苏 泰州 225300

摘要：为建立基于非洲猪瘟p30蛋白的间接ELISA抗体检测方法，实现检验结果自动化分析，该研究采用真核表达no-Tag p30蛋白作为固相抗原，采用棋盘法优化ELISA反应条件后验证其特异性、敏感性，利用Python编码ELISA结果自动分析软件。用建立的间接ELISA对2017年及2020-2024年从江苏某市收集的不同猪群700份血清样品进行ASFV抗体检测。结果表明：最佳反应条件为0.125 μg/ mL抗原4 ℃包被16 h，10 g/L明胶37 ℃封闭2 h，血清1∶100稀释37 ℃孵育20 min，二抗1∶10 000于37 ℃稀释孵育20 min，27 ℃下避光显色8 min，临界值为0.4。该方法对比商品化试剂盒总符合率为97.4%，敏感性为100%，特异性为96.4%。ELISA软件分析样本结果与人工计算一致，临床血清样品检测结果ASFV抗体总阳性率为6.14%，2017年和2024年均为阴性，而2020-2023年各年份均能检出ASFV抗体阳性，阳性率最低为1.61%，最高为16.70%。可见，该研究建立的方法特异性强，敏感性高，分析软件可自动辅助判定结果，可用于临床检测ASFV抗体，为ASF的快速诊断和防控提供了可靠的检测方法和便捷的结果分析工具。

关键词：非洲猪瘟；p30蛋白；间接ELISA；抗体检测；软件开发应用

基金资助：泰州市“凤城英才计划”113生物医药专项（评审类人才项目）（泰人才办〔2022〕23号）；2025亚夫科技服务项目KF（25）1213；山东省生猪产业技术体系疫病控制岗位（SDAIT-08-07）