检测胎儿弯曲菌三种亚种的多重PCR方法建立及初步应用

来源：疾病监测杂志2022年第8期北京时间：

作者：侯水平,周勇,和鹏,陶霞,王安娜,胡玉山,吴新伟,张晶

摘要：目的 建立一种检测胎儿弯曲菌胎儿亚种、性病亚种和龟亚种的多重PCR检测方法。方法 使用针对胎儿弯曲菌、性病亚种和龟亚种的特异性引物，优化反应体系及反应条件，使用38株菌株（18株胎儿弯曲菌和20株非胎儿弯曲菌）验证其特异性，并将该方法应用于53份爬行动物粪便筛查。结果 针对3种亚种均可扩增相应的片段，胎儿亚种只有1条359 bp大小的条带、性病亚种有2条分别为359 bp和156 bp大小的条带，龟亚种有2条分别为359 bp和266 bp大小的条带。 优化后的最佳扩增条件：退火温度58 ℃，引物MG3f和Cf359r浓度为0.1 μmol/L，ISC2mf和ISC2mr、CoA266f和CoA266r的浓度0.2 μmol/L。 对胎儿亚种、性病亚种和龟亚种的检出限分别为0.40 ng/μL、0.39 ng/μL和0.47 ng/μL。 使用18株胎儿弯曲菌和20株非胎儿弯曲菌其特异性为100%。 对53份爬行动物粪便进行筛查中有1份龟亚种阳性并分离出了相应的菌株。结论 本研究建立的多重PCR方法能利用1个反应体系同时鉴别3种亚种，从而为菌株快速鉴定、流行病学调查和溯源研究提供技术支持。

关键词：胎儿弯曲菌, 多重PCR, 检测方法, 飞行时间质谱