基于CRISPR-Cas12a蛋白的副溶血弧菌及tdh基因检测分析

来源：疾病监测杂志2022年第3期北京时间：

作者：卢盼,李哲,李臻鹏,赵文轩,肖文静,张天姿,陈家良,阚飙,逄波

摘要：目的 将重组酶介导等温核酸扩增技术（RAA）与成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）系统相结合，建立一种快速检测并分型副溶血弧菌的检测方法。 方法 通过纯化CRISPR相关蛋白Cas12a，设计和合成RAA引物、crRNA和单链DNA报告分子，建立副溶血弧菌的荧光和试纸条检测方法。 采用煮沸法提取细菌核酸，经RAA扩增后产物加入CRISPR-Cas12a检测系统，测试该方法的灵敏性和特异性。结果 本研究检测了110株副溶血弧菌和121株其他肠道致泻性细菌，符合率为99.1%，最低检测菌量为103 CFU/mL，CRISPR-Cas12a最低检测核酸浓度为77.5 pmol/L，灵敏性高于琼脂糖凝胶电泳法 。 对于50株携带tdh和12株不携带tdh的副溶血弧菌，仅1株tdh+副溶血弧菌未被鉴定出，鉴定成功率为98.4%。结论 本研究建立的CRISPR-RAA检测系统可快速、简单地检测副溶血弧菌及tdh基因，且有较强的特异性和灵敏性。

关键词：成簇的规律间隔短回文重复序列, 重组酶介导等温核酸扩增技术, 副溶血弧菌, 分子检测