多种一步法快速提取DNA对肺炎支原体PCR检测的影响

来源：疾病监测杂志2018年第6期北京时间：

作者：张军鸽,赵飞,刘立雍,马闪珊,单小云

摘要：目的 对比不同一步法提取DNA在肺炎支原体PCR检测中的效果及应用范围，为临床标本中肺炎支原体的检测提供依据。方法 以两种经典的DNA提取一步法（ROSE和Chelex-100法）及其优化方案和商品化DNA提取试剂盒，提取肺炎支原体纯培养菌株及30份肺炎支原体阳性临床咽拭子标本DNA，分别进行普通PCR和荧光PCR检测，对比不同方法提取的DNA对PCR检测结果的影响。结果 ROSE法和Chelex-100一步法中的SDS严重影响Taq酶活性，提取物稀释100倍方可进行荧光PCR扩增，稀释10倍可用于普通PCR扩增。改良的Chelex-100一步法提取肺炎支原体纯菌DNA产量最高，且PCR扩增效果最好。对于30份临床标本来说，试剂盒法、改良Chelex-100法和水煮法的阳性率分别为100.00%（30/30）、80.00%（24/30）和43.33%（13/30），且对相同肺炎支原体阳性标本提取的DNA，试剂盒法检测的循环阈值（Ct值）比上述两种方法分别小1.95和2.38。结论 经典一步法提取的DNA必须经稀释后方可作为扩增模板。改良的Chelex-100法操作简便，可用于纯菌培养的DNA提取。临床标本中肺炎支原体DNA提取以试剂盒法最优，改良的Chelex-100法提取的DNA也可用于临床标本中肺炎支原体的检测，但不可用于定量分析。

关键词：一步提取法, 肺炎支原体, 聚合酶链反应, 临床标本