食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究

来源：疾病监测杂志2016年第11期北京时间：

作者：梅玲玲,徐昌平,杨勇,占利,陈鸿鹄,张云怡,张俊彦,陈建才,程苏云

摘要：目的 利用叠氮溴乙锭（ethidium monoazide bromide，EMA）实时荧光聚合酶链反应（PCR）技术，建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法 根据志贺菌ipaH基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法，对30件模拟样品进行实样验证。结果 志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值（Ct）=32.10~3.19log（菌量）（R2=0.994）。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04，最高为26.54，而97株非志贺菌的Ct值均35或无Ct值（呈一条直线）。重复试验Ct值变异系数3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致，但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h，而常规分离培养方法则需要3～5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法，建议在食品检测中推广应用。

关键词：食品, 志贺菌, 叠氮溴乙锭, 实时荧光PCR