霍乱弧菌宿主整合因子亚单位的可溶性克隆表达

来源：疾病监测杂志2016年第4期北京时间：

作者：李晶,王洪霞,阚飙,梁未丽

摘要：目的 克隆表达霍乱弧菌全局性调节子宿主整合因子(integration host factor, IHF)亚单位基因ihfB。方法 以C7258染色体为模板, 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增ihfB基因, 扩增产物经NheⅠ和SapⅠ酶切后克隆入表达载体pXTB1;将ihfB的N端和亚单位基因ihfA的C端通过搭桥PCR重组, 重组片段N-ihfB-C-ihfA经NheⅠ和SapⅠ双酶切后克隆入表达载体pXTB1。重组质粒导入大肠埃希菌ER2566, 0.4 mmol/L IPTG诱导表达, 超声裂解, 上清经CBD柱吸附纯化, 二硫苏糖醇(DTT)柱上裂解洗脱。结果 成功构建表达野生型ihfB基因和嵌合体N-ihfB-C-ihfA的重组表达质粒pXTB1-ihfB和pXTB1-N-ihfB-C-ihfA, 并在宿主菌ER2566中诱导表达。pXTB1-ihfB为不溶性的包涵体表达, pXTB1-N-ihfB-C-ihfA为可溶性表达, 并获得高纯度的表达产物。结论 克隆表达了IHF 亚单位基因ihfB, IHF-的C端可显著提高IHF-的可溶性, 获得可溶性表达的纯化IHF-嵌合体蛋白, 为后续调控功能研究奠定了基础。

关键词：霍乱弧菌, 宿主整合因子, ihfB, 克隆表达