绵羊痘病毒多表位基因的构建及原核表达

来源：华中农业大学学报杂志2015年第2期北京时间：

作者：陈轶霞

摘要：通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头，串联合成1条全新的多表位嵌合基因mE，将其克隆到原核表达载体pET-32中，采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒，构建pET32-mE质粒；用IPTG在不同条件下诱导表达，确定最佳表达条件，表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明，重组蛋白是分子质量为41 ku的融合蛋白。在IPTG浓度为0.5 mmol/L，温度为37℃、诱导4 h时目的蛋白的表达量最大，约占菌体的32%。Western-blotting试验表明，目的蛋白可被羊痘血清识别。

关键词：绵羊痘病毒; 抗原表位; 多表位; 嵌合基因; 原核表达

基金资助：国家自然科学基金项目（31260609；31360533）； 西北民族大学中央高校基本科研业务费专项 (ZYZ2012072)