欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链基因的克隆及表达分析

来源：华中农业大学学报杂志2015年第5期北京时间：

作者：冯建军

摘要：通过 RT-PCR 技术克隆欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla）Ig轻链基因cDNA全长序列，命名为AaIgL，其全长为1 016 bp，开放阅读框为714 bp，编码238个氨基酸。将该基因片段与 pET-his 载体连接构建原核表达载体，在大肠杆菌 BL21 中诱导表达，其表达产物经 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析，结果表明新增的 27 ku 蛋白条带与预期值相符，且与兔抗欧洲鳗鲡 IgM 血清发生特异性显色反应，证实了AaIgL基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达；实时荧光定量PCR检测结果发现：AaIgL在欧洲鳗鲡各组织中均有表达，其中脾脏的表达量最高，肾脏和心脏中也有较高的表达水平，而肝脏、肌肉、鳃以及肠中的表达量较低；欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后脾脏和肾脏的AaIgL表达水平明显上升，其峰值分别为第7天和第14天， AaIgL在脾脏的表达量显著高于肾脏，但是第21天后均恢复至正常水平。以上结果表明，AaIgL在欧洲鳗鲡机体免疫防御中发挥重要作用，脾脏是AaIgL基因的主要表达器官。

关键词：欧洲鳗鲡; 免疫球蛋白轻链; 原核表达; 荧光定量 PCR

基金资助：国家自然科学基金项目 (31272685)； 福建省教育厅项目 (JA11150)； 福建省海洋与渔业厅项目 (201212140006)； 集美大学科研基金项目(C60819)