日本囊对虾组织蛋白酶B基因的原核表达及纯化

来源：华中农业大学学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：黄媛

摘要：采用原核表达的方法得到日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）组织蛋白酶B基因的重组蛋白。以日本囊对虾卵巢组织为试验材料，采用双标签（GST和His）的方法，用带有Eco R Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点以及6×Histag的特异引物扩增Cathepsin B的开放阅读框，并连接至表达质粒pGEX4T2中。将重组表达质粒导入大肠杆菌BL21中，在30℃条件下，用终浓度为1 mmol/L的IPTG（isopropyl βD1thiogalactopyranoside）诱导5 h得到最佳诱导量，His亲和柱进行纯化，纯化蛋白依次于8、6、4、2、1、0 mol/L尿素缓冲液中梯度透析，得到复性后可溶于水的重组蛋白，经SDSPAGE检测，得到单一条带，其分子质量约为63 ku。取冻干后的蛋白制备多克隆抗体，抗体效价达50 000， 经Western blot检测，同样可在63 ku处得到该条带，表明制备的组织蛋白酶B（CB）多克隆抗体具有特异性，该抗体可特异识别CB蛋白。

关键词：日本囊对虾; 卵巢; 组织蛋白酶B基因; 原核表达; 多克隆抗体

基金资助：国家自然科学基金项目（31272685）; 福建省自然科学基金项目（2012J01140）； 福建省教育厅项目（JA12193）