产酸克雷伯氏菌游动性减弱突变体的筛选

来源：华中农业大学学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：江绍锋

摘要：以产酸克雷伯氏菌KO108为研究对象，通过构建转座子突变体文库，筛选获得2株游动性显著降低的突变菌株，并以转座子mTn5gusApgfp21构建突变体库，利用地高辛生物标记gfp基因序列作为探针，Southern杂交验证突变体库的质量，根据杂交条带判断mTn5gusA-pgfp21转座子插入染色体的拷贝数，以反向PCR获取未知序列，通过基因组学分析预测游动性相关基因。结果表明：产酸克雷伯氏菌KO108具Kan抗性标记、GUS活性、GFP遗传标记的突变体库可由两亲结合经转座子mTn5gusApgfp21转座突变获得；随机选择100株突变体进行游动性筛选,仅获得2株游动性显著降低的目标菌株MA和MD; MA、MD与KO108差异显著（P<0.05），而MA和MD之间没有显著差异；Southern杂交结果显示MA和MD的转座子mTn5gusApgfp21为单插入，且插入位点所在的酶切片段大小不同；经反向PCR、测序、序列分析，发现MA突变基因为醌类氧化还原酶（NAD(P) H:quinone oxidoreductase）（NQR）基因簇的NqrA，MD突变基因为LPS脂多糖生物合成基因簇基因；生长曲线检测显示KO108和MA、MD无显著差异；菌膜检测发现MD与KO108、MA有一定差异，但KO108与MA之间无显著性差异；以Biolog ECO检测KO108和MA、MD的碳源利用情况，结果表明MA和MD 72 h后仍然不能利用羧酸类碳源D半乳糖酸γ内酯和2羟基苯甲酸。

关键词：酸克雷伯氏菌; Tn5插入突变; 突变体; 游动性

基金资助：国家自然科学基金项目(31060120); 广西壮族自治区自然科学基金项目(2013GXNSFAA019059); 广西研究生教育创新计划项目(YCSZ2014090)