细菌sRNA调控靶标的双质粒筛选系统构建

来源：华中农业大学学报杂志2017年第6期北京时间：

作者：王洪洋

摘要：以pMycVec1/pMycVec2载体为基础，构建了筛选和鉴定细菌sRNA调控靶标的双质粒系统。对pMycVec2载体的多克隆位点进行改造，并加入强启动子rrnBp和有效转录终止子，获得可定向克隆和转录sRNA的质粒pMycVec2-D；对pMycVec1载体的多克隆位点进行改造，并加入弱启动子Pwk和有效转录终止子，获得了分别用报告基因lacZ和GFP来检测sRNA靶标序列翻译水平的质粒pMycVec1-lacZ和pMycVec1-GFP。最后，利用2对已知的sRNA与其调控靶标MicC/ompC mRNA和MicF/ompF mRNA ，通过β-半乳糖苷酶活性和菌体荧光值检测，表明双质粒系统能有效检测sRNA与调控靶标的互作。

关键词：细菌; 非编码小RNA; 双质粒系统; 调控靶标

基金资助：国家自然科学基金项目（31470170）