运用Gibson克隆技术构建蒺藜苜蓿成熟根瘤的酵母AD-cDNA文库

来源：华中农业大学学报杂志2018年第2期北京时间：

作者：陈琳

摘要：以蒺藜苜蓿（A17）的成熟根瘤为材料，联合应用Gibson克隆技术和SMART cDNA技术构建cDNA文库，其转化效率达到7.74×105 cfu/3 μg pGADT7-Rec-New。随机菌落PCR检测结果表明，插入DNA片段的大小为0.5 ~2.0 kb，其中插入片段＞0.75 kb的占45.6%，文库的重组效率达到91.7%，构建的cDNA文库以质粒形式保藏备用。采用此法不仅可以构建用于酵母单杂交或双杂交的文库，同样也适用于其他质粒文库的构建。利用酵母单杂交技术，以在根瘤中高表达基因启动子元件为诱饵，筛选构建的文库，得到拟似与DNA互作的蛋白质。

关键词：蒺藜苜蓿; 根瘤; AD-cDNA文库; Gibson克隆技术

基金资助：国家自然科学基金项目（31670240）；教育部高等学校博士学科点专项（20130146130003）