OsCPK12基因功能研究和互作蛋白筛选

来源：华中农业大学学报杂志2019年第6期北京时间：

作者：周非凡

摘要：通过反向遗传学研究方法，构建OsCPK12基因敲除和超表达突变体，用150 mmol/L的NaCl进行盐胁迫处理，结果显示：超表达株系无论株高、根长还是叶片状态都优于野生型，而基因敲除突变体相比于野生型株高明显矮化，根的发育形态差，叶片枯黄，证实OsCPK12对水稻耐盐有正调控作用。用realtime PCR对突变体株系的根、叶鞘、叶片多个部位的激素信号转导路径基因的表达量进行分析，结果显示：超表达株系的多个激素受体编码基因和下游调控基因表达量显著上调，说明OsCPK12参与激素的信号转导并影响水稻抗逆反应。为进一步研究OsCPK12的基因功能，通过在水稻原生质体中表达融合蛋白进行OsCPK12的亚细胞定位，确定OsCPK12定位于质膜。用酵母双杂交的方法在水稻中花11膜蛋白文库中筛选到2个水通道蛋白OsPIP11和OsPIP27，且酵母点对点验证为阳性，推测OsCPK12可能通过与OsPIP11和OsPIP27互作，调控水分子进出细胞，提高了水稻的耐盐性。

关键词：信号转导; 水稻; OsCPK12; 基因敲除; 盐胁迫; 酵母双杂交

基金资助：国家自然科学基金项目（31571753)