SCF泛素连接酶的体外泛素化体系构建与检测

来源：华中农业大学学报杂志2024年第2期北京时间：

作者：胡健健，梅文聪，张文慧，刘主

单位：作物遗传改良全国重点实验室/湖北洪山实验室/华中农业大学生命科学技术学院，武汉 430070

摘要：为研究蛋白质的体外泛素化过程，利用大肠杆菌表达系统异源表达和纯化APPBP1/UBA3 （E1）、UBC12 （E2）、Cullin1-Rbx1 （E3）和Nedd8 （neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 8）蛋白，制备FITC-Cysteine 绿色荧光素标记的泛素Ub（Ubiquitin），构建了SCF泛素连接酶的体外泛素化体系，同时实现快速检测SCF泛素连接酶中Cullin1蛋白的自泛素化修饰。结果表明，建立的体外SCF E3自泛素化活性反应体系具有较高的可操作性和便利性。

关键词：SCF泛素连接酶;泛素化修饰;Cullin1蛋白;荧光标记

基金资助：国家自然科学基金项目（32071226）