基于CRISPR/Cas9系统构建NCOA4敲除的MARC-145细胞系及其对HP-PRRSV复制的影响

来源：华中农业大学学报杂志2025年第5期北京时间：

作者：官凯锋，袁晨阳，吕镕州，张改平

单位：1.北京大学现代农学院， 北京 100871;2.西北农林科技大学动物医学院， 杨凌 712100;3.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室， 郑州 450002

摘要：为探究NCOA4介导的铁自噬在PRRSV感染中的作用，利用CRISPR/Cas9技术在PRRSV易感的MARC-145细胞中敲除铁自噬的关键受体NCOA4基因，并结合Sanger测序和Western blot检测NCOA4的敲除效率。同时运用流式细胞术、qPCR、Western blot、TCID50等对NCOA4缺失型和野生型MARC-145进行细胞周期、细胞活性检测，以及检测NCOA4缺失对PRRSV复制的影响。结果显示，本研究成功构建NCOA4基因敲除的MARC-145细胞系。此外，相比于野生型MARC-145细胞系，敲除NCOA4显著增加PRRSV ORF7 mRNA、N蛋白及病毒滴度水平，同时促进FTH 1蛋白表达。结果表明，铁自噬的关键受体基因NCOA4缺失能促进PRRSV复制。

关键词：CRISPR/Cas9;NCOA4;铁自噬;猪繁殖与呼吸综合征;基因敲除;细胞活性

基金资助：国家自然科学基金项目（32302844）；中国博士后科学基金面上项目（2024M750114）