miR-204-3p抑制剂对二氧化硅诱导的肺泡上皮细胞EMT过程与矽肺纤维化的影响

来源：环境与职业医学杂志 2025年第5期北京时间：

作者：陈芳, 俞静, 胡文选, 皮洋阳, 张玺, 王露凝, 赵萍, 王发选,

摘要：背景矽肺发病机制尚未完全明确，微小RNA（miRNA）可能参与矽肺的发生发展。目的观察miR-204-3p抑制剂对二氧化硅粉尘诱导的肺泡上皮细胞上皮-间充质转化（EMT）过程以及矽肺纤维化的影响。方法Transwell小室构建巨噬细胞与上皮细胞共培养模型，将NR8383巨噬细胞种入Transwell小室的上室，下室种入RLE-6TN细胞，培养24 h，弃去下室培养液，使用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗3次，加入无血清培养基。将细胞分为4组：对照组、矽肺组、miRNA NC组、miR-204-3p抑制剂组。miRNA NC组和miR-204-3p抑制剂组下室分别转染miRNA NC和miR-204-3p抑制剂，其余两组下室加入等量无血清培养基，24 h后，除对照组外，其余三组Transwell上室加入800 μg·mL−1二氧化硅粉尘，对照组加入等量无血清培养基。显微镜下观察各组细胞形态变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和Western blot检测EMT相关因子α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）、兔抗鼠间充质钙粘蛋白（N-ca）、兔抗鼠上皮钙粘蛋白（E-ca）的mRNA和蛋白表达水平；RT-qPCR和Western blot检测纤维化相关因子Collagen I、Collagen III、Fibronectin的mRNA和蛋白表达水平；免疫荧光检测α-SMA、N-Cadherin、E-Cadherin荧光表达强度。结果形态学观察到，对照组RLE-6TN细胞呈规则卵圆形，经二氧化硅处理后，细胞多呈长梭形，经miR-204-3p抑制剂干预后，长梭形细胞增多且细胞间隙变大。RT-qPCR结果发现，与对照组相比，矽肺组EMT相关标志物α-SMA、Vimentin、N-Cadherin mRNA相对表达水平升高（P<0.05），E-Cadherin mRNA相对表达水平下降（P<0.05），纤维化相关标志物Collagen I、Collagen III、Fibronectin mRNA相对表达水平升高（P<0.05）；与miRNA NC组相比，miR-204-3p抑制剂组EMT相关标志物α-SMA、Vimentin、N-Cadherin mRNA相对表达水平升高（P<0.05），E-Cadherin mRNA相对表达水平下降（P<0.05），纤维化相关标志物Collagen I、Collagen III、Fibronectin mRNA相对表达水平升高（P<0.05），Western blot结果发现，与对照组相比，矽肺组EMT相关标志物α-SMA、Vimentin、N-Cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05），E-Cadherin蛋白表达水平下降（P<0.05），纤维化相关标志物Collagen I、Collagen III、Fibronectin蛋白表达水平升高（P<0.05）；与miRNA NC组相比，miR-204-3p抑制剂组EMT相关标志物α-SMA、Vimentin、N-Cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05），E-Cadherin蛋白表达水平下降（P<0.05），纤维化相关标志物Collagen I、Collagen III、Fibronectin蛋白表达水平升高（P<0.05）。免疫荧光结果显示，与对照组相比，矽肺组α-SMA、N-Cadherin荧光强度增强，E-Cadherin荧光强度降低；与miRNA NC组相比，miR-204-3p抑制剂组α-SMA、N-Cadherin荧光强度增强，E-Cadherin荧光强度降低。结论miR-204-3p抑制剂加重了二氧化硅诱导的RLE-6TN细胞EMT过程以及矽肺纤维化，miR-204-3p在矽肺纤维化中起负向调控作用。

关键词：二氧化硅粉尘, 肺泡上皮细胞, 肺泡上皮细胞上皮-间充质转化过程, 矽肺纤维化, miR-204-3p,