lncRNA LINC02859介导Wnt通路在甲基硝基亚硝基胍诱发胃癌中的机制研究

来源：环境与职业医学杂志 2024年第10期北京时间：

作者：张雪玲, 曾勇, 王婷, 王建丁, 肖登, 王俊玲, 李成云,

摘要：背景胃癌发生是多因素共同作用的复杂过程，长链非编码RNA（lncRNA）在胃癌进程中可作为致癌或抑癌基因发挥重要作用。研究发现，lncRNA LINC02859在胃癌组织中表达下调且与肿瘤的分化程度及病理分期相关，同时在环境致癌物甲基硝基亚硝基胍（MNNG）诱发细胞恶性转化的发生发展中发挥重要作用，但其作用机制尚不明确。目的探索胃癌相关lncRNA LINC02859基因在MNNG诱导人正常胃黏膜细胞（GES-1）恶性转化中的作用和潜在机制。方法选取甘肃省胃癌高发区110例胃癌患者作为生物标本来源，由医院专业病理医师采集患者癌组织及距肿瘤边缘5 cm以上癌旁正常胃黏膜组织，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测癌及癌旁组织中LINC02859的表达水平。通过高通量测序及生物信息学分析发现与LINC02859共表达关系的基因潜在调控的信号通路。取细胞代数较低且形态正常的GES-1，待细胞融合达到70%~80%时，分别加入0、0.25和0.5 μmol·L−1的MNNG染毒液培养48 h后检测LINC02859基因表达水平，采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测细胞增殖活性，平板细胞克隆形成试验检测细胞克隆形成，划痕实验检测细胞迁移能力，评估MNNG染毒对细胞形态及功能的影响；采用RT-qPCR及免疫印记实验（Western blotting）检测Wnt信号通路关键蛋白的表达水平。结果RT-qPCR结果显示，与癌旁组织比较，LINC02859在胃癌组织中呈低表达，差异有统计学意义（P < 0.05）；Pathway富集分析显示，LINC02859潜在调控Wnt通路。体外恶性转化实验提示，MNNG暴露后，恶性转化第五代细胞（MC-5）与对照组细胞相比，其形态发生改变、集落形成数量增加、增殖和迁移能力高于GES-1细胞；与正常GES-1细胞比较，0.25和0.5 μmol·L−1 MNNG暴露的GES-1细胞，LINC02859基因表达量均降低，0.5 μmol·L−1 MNNG暴露后，Wnt通路关键蛋白转录因子 7（TCF7）、Axis抑制剂（Axin1）、磷酸化糖原合成酶激酶-3-Beta（p-GSK-3β）、酪蛋白激酶-1（CK1）和β-连环蛋白（β-catenin）表达水升高，差异有统计学意义（P < 0.05）；而过表达LINC02859可抑制MNNG对Wnt通路的激活作用。结论LINC02859基因在胃癌患者癌组织中呈低表达。MNNG暴露可引起GES-1细胞形态及功能改变，LINC02859基因表达异常下调，同时激活Wnt信号通路；过表达LINC02859可抑制MNNG暴露诱导胃癌进程中的Wnt信号通路激活。

关键词：胃癌, <i>lncRNA LINC02859</i>, 甲基硝基亚硝基胍, 恶性转化, Wnt通路,