砷及其代谢物对BEAS-2B细胞p53基因表达影响

来源：环境与职业医学杂志 2024年第4期北京时间：

作者：刘娜, 江金鋆, 马和, 赵瑞欢, 何越峰, 文卫华,

摘要：背景砷是人类致癌物。砷及其代谢物会影响p53表达，但砷及其代谢物处理人正常肺上皮细胞系（BEAS-2B）后，p53磷酸化及泛素化水平的变化尚不清楚。目的探讨砷及其代谢物一甲基胂酸（MMA）和二甲基胂酸（DMA）对BEAS-2B细胞中抑癌基因p53表达的影响。方法用不同浓度亚砷酸钠（NaAsO2）染毒细胞，利用CCK-8试剂检测细胞活力，确定NaAsO2染毒BEAS-2B细胞的剂量和时间。基于细胞活力结果，将细胞分为两组，即不同浓度亚砷酸钠组和砷甲基化代谢产物组，不同浓度亚砷酸钠组染毒剂量分别为0、2、4、6 μmol·L−1 NaAsO2；砷甲基化代谢产物组包括0 μmol·L−1 NaAsO2（对照组）、6 μmol·L−1 MMA组、6 μmol·L−1 DMA组和6 μmol·L−1 NaAsO2组。48 h收集细胞，提取总蛋白和总RNA，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测p53 mRNA相对表达水平，采用免疫共沉淀和蛋白质免疫印迹法检测p53泛素化水平，通过蛋白免疫印迹法检测p53蛋白、p53 Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白的相对表达水平。结果在BEAS-2B细胞中，与对照组相比，不同浓度NaAsO2染毒后，细胞存活率均降低（P＜0.05），并且NaAsO2浓度在6 μmol·L−1时细胞存活率约为50%。与对照组相比，不同浓度的NaAsO2（2、4、6 μmol·L−1）处理后p53 mRNA相对表达水平呈逐渐降低趋势，差异具有统计学意义（P＜0.05）；不同浓度的NaAsO2诱导p53蛋白、Ser9位点磷酸化蛋白相对表达水平均逐渐降低（P＜0.05）；不同浓度的NaAsO2诱导p53 Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平均呈逐渐降低趋势，但仅6 μmol·L−1NaAsO2组低于对照组且差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比，MMA组和DMA组p53 mRNA、p53蛋白、Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平无明显影响。与对照组相比，NaAsO₂染毒后，p53泛素化表达水平明显下降，K48位点泛素化表达水平下降。结论砷引起BEAS-2B细胞p53蛋白表达降低主要由于其磷酸化途径被抑制和mRNA表达降低，p53泛素化水平减少所致的蛋白变化未占主导作用。MMA和DMA对p53基因表达无影响。

关键词：砷, <i>p53</i>, 一甲基胂酸, 二甲基胂酸, 泛素化,