miR-204-3P对二氧化硅粉尘所致大鼠矽肺纤维化的干预作用

来源：环境与职业医学杂志 2024年第4期北京时间：

作者：胡文选, 俞静, 陈芳, 皮洋阳, 焦子铭, 王发选,

摘要：背景长期暴露于游离二氧化硅颗粒会导致肺组织的纤维化，微小核糖核酸（miRNA）的异常表达可以影响纤维化的发生和进程。目的通过非暴露气管滴入二氧化硅粉尘悬液构建大鼠矽肺模型，通过尾静脉注射miR-204-3p过表达腺病毒观察其对二氧化硅粉尘所致矽肺纤维化的干预作用。方法40只SD大鼠随机分为4组：对照组、矽肺模型组、miRNA-NC组和miR-204-3p干预组。在乙醚麻醉下，矽肺模型组、miRNA-NC组和miR-204-3p干预组的大鼠一次性气管非暴露注入游离二氧化硅粉尘悬液1 mL（50 mg·mL−1），而对照组则注入相同体积的生理盐水。染尘30 d时，miR-204-3p干预组尾静脉注射包装rno-mir-204的腺病毒载体过表达miR-204-3p，miRNA-NC组给予空病毒载体，并在正常饲养30 d后使用水合氯醛麻醉处死动物，取肺组织进行后续实验。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组大鼠肺组织中miR-204-3p的相对表达水平，苏木精伊红染色、马森染色、天狼星红染色进行病理学观察，免疫组织化学法检测纤连蛋白（Fibronectin）、I型胶原蛋白（Collagen I）在各组大鼠肺组织中的表达情况，RT-qPCR检测各组大鼠肺组织中纤维化标志物Fibronectin、波形蛋白（Vimentin）、Collagen I、III型胶原蛋白（Collagen III）的mRNA相对表达水平，采用Western blot法检测各组大鼠肺组织中纤维化标志物Fibronectin、Vimentin、Collagen I、Collagen III的蛋白表达水平。结果肺组织大体解剖结果显示：正常肺组织呈粉红色，质地柔软表面光滑，而矽肺模型组织呈灰白色，质地较硬，表面可见瘢痕和灰白色的矽结节。与矽肺模型组相比miR-204-3p干预组肺组织的颜色变得红润，表面较为光滑，质地也变得柔软。染色结果显示：正常肺组织组织肺泡壁薄、肺泡内有少量的毛细血管、肺泡结构清晰完整；矽肺模型组肺组织中肺泡壁变厚、肺间隔部分断裂、肺泡结构缺损并伴随大量胶原纤维的沉积；miR-204-3p干预组的肺组织肺泡结构比较清晰且有少量胶原纤维的沉积。RT-qPCR结果显示：与对照组相比，矽肺模型组和miRNA-NC组肺组织中miR-204-3p的相对表达水平均降低（P＜0.05），miR-204-3p干预组肺组织中miR-204-3p的相对表达水平明显升高（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示：与对照组相比矽肺模型组肺组织中Fibronectin和Collagen I的表达水平均升高（P＜0.05），与矽肺模型组相比，miR-204-3p干预组大鼠肺组织中Fibronectin和Collagen I的相对表达水平明显降低（P＜0.05）。RT-qPCR和Western blot结果显示：与对照组相比矽肺模型组大鼠肺组织中纤维化因子Fibronectin、Vimentin、Collagen I、Collagen III的基因相对表达水平和蛋白相对表达水平上升（P＜0.05），与矽肺模型组相比，miR-204-3p干预组大鼠肺组织中纤维化因子Fibronectin、Vimentin、Collagen I、Collagen III的基因相对表达水平和蛋白相对表达水平均有所降低（P＜0.05）。结论二氧化硅粉尘可引起大鼠肺组织纤维化，体内过表达miR-204-3P可以减轻二氧化硅粉尘引起的大鼠矽肺纤维化。

关键词：二氧化硅, 矽肺, 纤维化, miR-204-3p, 干预,