氟咯草酮对小鼠睾丸及TM4细胞凋亡和Nrf2/HO-1及NFκB信号通路的影响

来源：环境与职业医学杂志 2023年第6期北京时间：

作者：赵淑琦, 王彦娜, 倪志晶, 田芳, 李睿, 张济明, 常秀丽, 周志俊,

摘要：背景氟咯草酮（FLC）具有雄性生殖毒性，可引起氧化应激状态下睾丸组织及支持细胞凋亡，核因子红细胞2相关因子2/血红素加氧酶-1（Nrf2/HO-1）信号通路以及核因子κB（NFκB）信号通路是否在该过程中发挥作用值得关注。目的观察FLC体内/外染毒小鼠睾丸组织及小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞对细胞凋亡及Nrf2/HO-1和NFκB信号通路的影响。方法（1）动物实验。获取雄性C57BL/6小鼠 FLC（染毒剂量为每日0、3、15、75和375 mg·kg−1）经口染毒28 d后睾丸组织样本；通过比色分析睾丸组织匀浆中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，观察睾丸组织氧化应激水平，TUNEL染色观察睾丸组织凋亡情况，免疫组化观察Nrf2、NFκB的表达及分布，Western blotting检测睾丸组织匀浆中Nrf2、HO-1、醌NADH脱氢酶1（NQO1）、NFκB、NFκB抑制因子激酶β（IKKβ）、磷酸化NFκB抑制因子α（P-IκBα）蛋白表达水平。（2）细胞实验。40、80、120、160、200 μmol·L−1 FLC对TM4细胞系染毒6 h，CCK-8细胞计数，试剂盒检测细胞活力。40、80、160 μmol·L−1 FLC染毒6 h，通过流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blotting检测Nrf2、HO-1、NQO1、NFκB、IKKβ、IκBα蛋白表达水平。结果（1）动物实验。雄性C57BL/6小鼠经口FLC染毒28 d后，生精小管间质及基底部发生细胞凋亡。与对照组相比，375 mg·kg−1 FLC染毒组睾丸组织中MDA含量明显升高（P<0.05），SOD活性明显下降（P<0.05）。375 mg·kg−1 FLC染毒后生精小管间质及基底部发生细胞凋亡。免疫组化结果显示染毒组生精小管间质及基底部Nrf2、NFκB表达。与对照组相比，Nrf2、NQO1、P-IκBα、NFκB、IKKβ蛋白水平在15、75、375 mg·kg−1组均明显升高（P<0.001），HO-1蛋白水平在375 mg·kg−1组明显升高（P<0.001）。（2）细胞实验。与对照组相比，40、80、120、160、200 μmol·L−1 FLC组TM4细胞活力明显下降（P<0.01）；细胞凋亡率明显升高（P<0.05），40、80、160 μmol·L−1 FLC染毒后细胞凋亡比例从对照组的5.7%分别提高至7.4%、9.4%、11.7%。Nrf2蛋白水平在40 μmol·L−1 组明显升高（P<0.01），80、160 μmol·L−1 组明显降低（P<0.01），HO-1蛋白水平在40、80、160 μmol·L−1 组明显升高（P<0.01）。NQO1蛋白水平在40 μmol·L−1 组明显升高（P<0.01）。NFκB蛋白水平在80、160 μmol·L−1 组明显升高（P<0.001），IκBα蛋白在各染毒组均明显降低（P<0.001），各染毒组IKKβ蛋白无明显变化。结论FLC诱导睾丸组织凋亡，该过程中涉及Nrf2/HO-1信号通路和NFκB信号通路。体外研究验证FLC损伤TM4细胞活力诱导细胞凋亡，激活Nrf2/HO-1和NFκB信号通路。

关键词：氟咯草酮, 睾丸支持细胞, TM4细胞, 凋亡, 核因子红细胞2相关因子2, 核因子κB,