氧化应激、PSMB5、TFEB和溶酶体在亚砷酸钠致大鼠肝损伤中的作用

来源：环境与职业医学杂志 2022年第10期北京时间：

作者：汪红铃, 时明阳, 毕顶念, 支海燕, 胡倩, 胡勇,

摘要：背景地方性砷中毒肝损伤较为严重。研究表明，氧化应激、蛋白酶体β5亚基（PSMB5）、调节转录因子EB（TFEB）和溶酶体与肝损伤有关，但它们与砷中毒肝损伤的具体联系尚不清楚。目的利用课题组前期建立的亚砷酸钠（NaAsO2）致大鼠肝损伤模型，检测肝组织中PSMB5、TFEB和溶酶体关联膜蛋白1（LAMP1）的表达。方法24只SPF级Wistar大鼠随机分为对照组，低、中、高浓度组，每组6只，雌雄各半；染毒浓度分别为0、25、50、100 mg·L−1 NaAsO2水溶液，染毒24周。染毒结束后，麻醉大鼠取肝脏。采用化学比色法检测肝组织碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（ALT）、总胆汁酸（TBA）、过氧化氢酶（CAT）水平；采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测肝组织脂质过氧化物（LPO）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）、LAMP1、组织蛋白酶D（CTSD）水平；采用实时荧光定量PCR法检测肝组织PSMB5、TFEB转录表达水平；采用免疫组化检测肝组织PSMB5、TFEB、磷酸化TFEB（p-TFEB）蛋白表达情况。结果化学比色法和ELISA法结果显示：与对照组相比，各染砷组大鼠肝匀浆ALP、TBA、LAMP1，中、高浓度组ALT、LPO，高浓度组4-HNE、CTSD水平均升高，而各染砷组CAT活性均降低（P＜0.05）。实时荧光定量PCR结果显示：各染砷组肝组织PSMB5、TFEB转录水平与对照组相比均下降（P＜0.05）。免疫组化结果显示：与对照组比较，各染砷组肝组织PSMB5，中、高浓度组TFEB蛋白表达均下降，而各染砷组p-TFEB蛋白表达均升高（P＜0.05）；随染砷浓度增加，TFEB蛋白表达在胞核逐渐减弱，p-TFEB蛋白表达在细胞质中逐渐增强，p-TFEB在胞核未见表达。Pearson相关性分析结果显示：肝组织PSMB5与CAT呈正相关（r=0.818，P＜0.05），与4-HNE、p-TFEB呈负相关（r=−0.582，r=−0.899；P＜0.05）；TFEB与CTSD、LAMP1均呈负相关（r=−0.457，r=−0.564；P＜0.05）；CTSD与ALT、ALP均呈正相关（r=0.529、r=0.485；P＜0.05）。结论NaAsO2长期暴露可诱导氧化应激发生，抑制PSMB5和TFEB表达，促使细胞质中p-TFEB累积增多，活性TFEB入核减少，溶酶体受损，引起肝脏损伤。

关键词：砷, 氧化应激, 肝损伤, 溶酶体, 蛋白酶体β5亚基, 转录因子EB,