微小RNA-18a靶向Notch2抑制NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达

来源：环境与职业医学杂志 2022年第7期北京时间：

作者：郝家祺, 文静, 刘春城, 蔡禄,

摘要：背景 矽肺主要病理特征是肺部纤维化。矽肺发生发展过程中多种 miRNAs 具有调控作用。 目的 利用成纤维细胞系，探究微小RNA-18a（miR-18a）对细胞外基质相关基因表达的影响，并对其作用机制进行验证。 方法 在成纤维细胞系NIH-3T3细胞中转染miR-18a模拟物以及神经源性基因座Notch同源蛋白2（Notch2）基因的小干扰RNA（siRNA）。通过应用实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测Acta2、Col1a1及Notch2基因mRNA表达变化，通过蛋白质印迹技术检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Notch2蛋白的表达变化，利用双荧光素酶报告载体在人胚肾细胞HEK293T细胞中验证miR-18a调控Notch2基因的直接作用位点。 结果 qRT-PCR检测结果表明，在NIH-3T3细胞中，miR-18a模拟物过表达36 h抑制了Col1a1以及Acta2的mRNA表达（P Notch2基因表达的影响，通过蛋白质印迹技术检测发现过表达miR-18a模拟物 36 h可以在蛋白水平上抑制Notch2的表达。双荧光素酶报告载体检测结果发现，在HEK293T细胞中，无论是过表达miR-18a模拟物或者抑制物 24 h均证明了Notch2是 miR-18a 的直接靶基因。当Notch2被抑制36 h时，qRT-PCR检测发现Acta2和Col1a1基因表达下调（P 结论 本研究发现miR-18a可以通过直接作用于靶基因Notch2的3’UTR而抑制其表达，从而抑制成纤维细胞系NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达。

关键词：矽肺, 微小RNA-18a, 神经源性基因座Notch同源蛋白2,