p,p'-DDE对胰岛素瘤细胞H19差异甲基化区甲基化及胰岛素分泌的影响

来源：环境与职业医学杂志 2022年第5期北京时间：

作者：宗艳秋, 谢华森, 李晓青, 王莉君, 杨磊, 宋杨,

摘要：背景 糖尿病是全球重要的公共卫生问题。研究表明二氯二苯基二氯乙烷（p,p'-DDE）与2型糖尿病的发病密切相关，然而相关分子机制尚不清楚。 目的 探讨p,p'-DDE对大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）H19 差异甲基化区（DMR）甲基化及胰岛素分泌的影响。 方法 用不同浓度的p,p'-DDE（0、3.125、6.25、12.5、25、50、75 µmol·L−1）染毒INS-1细胞24 h，采用CCK-8法检测INS-1细胞活力；以0、12.5、25、50 µmol·L−1 p,p'-DDE作为后续实验浓度，染毒24 h。采用亚硫酸氢盐修饰测序法检测H19 DMR 24个CpG位点甲基化水平；采用实时荧光定量PCR检测胰岛素样生长因子2（IGF2）基因转录水平；采用Western blotting检测IGF2和1型胰岛素样生长因子受体（IGF1R）蛋白水平；采用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验测定INS-1细胞胰岛素分泌功能（高糖和低糖浓度分别为5、25 mmol·L−1）。 结果 与对照组相比，12.5 µmol·L−1 p,p'-DDE增加INS-1细胞活力，然而，50、75 µmol·L−1 p,p'-DDE抑制细胞活力（P−1为最高染毒浓度。25 µmol·L−1 p,p'-DDE暴露导致H19 DMR CpG18、CpG22~CpG24位点甲基化水平下调，50 µmol·L−1 p,p'-DDE暴露导致H19 DMR CpG10~CpG24位点甲基化水平下调（PP−1）p,p'-DDE均可下调胰岛细胞IGF2 mRNA、蛋白表达和IGF1R蛋白表达，IGF2转录水平分别降低为对照组的67.8%、68.6%、62.5%，蛋白水平分别降低为对照组的73.3%、79.5%、80.9%，IGF1R蛋白水平分别降低为对照组的54.8%、25.6%、12.9%（P−1葡萄糖）下，不同浓度p,p'-DDE均抑制胰岛素分泌水平，分别降低为对照组的85.0%、58.6%、49.5%（P 结论 p,p'-DDE下调胰岛细胞H19 DMR甲基化水平，干扰IGF2/IGF1R信号通路，导致胰岛素分泌功能障碍。

关键词：二氯二苯基二氯乙烷, 糖尿病, 胰岛功能, <i>H19</i>, DNA甲基化, 胰岛素样生长因子2, 1型胰岛素样生长因子受体,