长链非编码RNABRE-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其调控功能

来源：环境与职业医学杂志 2021年第7期北京时间：

作者：王娴, 张艳秋, 申娴, 尹立红, 浦跃朴, 梁戈玉,

摘要：背景非小细胞肺癌(NSCLC)是严重危害人类健康的恶性肿瘤, 长链非编码RNA (lncRNA)可能在其发生发展中发挥重要作用。目的探讨lncRNA BRE-AS1在NSCLC中的表达、生物学功能和调控作用, 为进一步了解NSCLC发病机制提供理论依据。方法利用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术对91例来自南京胸科医院的原发性NSCLC患者的癌组织和癌旁组织以及NSCLC细胞中BRE-AS1表达水平进行检测, 应用TCGA RNASeqV2系统分析TCGA数据库中BRE-AS1在1 016例NSCLC组织和110例正常组织中的表达水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线评价BRE-AS1对NSCLC的诊断价值, 应用t检验分析不同临床特征NSCLC患者的BRE-AS1表达水平。采用慢病毒转染在NSCLC细胞A549中构建BRE-AS1过表达稳转细胞株, 分别以CCK8法和流式细胞术检测BRE-AS1对细胞增殖、周期及凋亡的影响。通过功能富集分析BRE-AS1的下游信号通路并用Western blotting法检测信号通路中关键蛋白表达水平。结果RT-qPCR和TCGA数据库分析结果显示BRE-AS1在NSCLC组织RT-qPCR: 差异表达倍数(FC)=-13.15, TCGA: FC=-4.85, P < 0.05和NSCLC细胞A549(FC=-4.87, P < 0.05)中表达下调。ROC分析结果显示BRE-AS1对NSCLC具有较强的诊断能力(NSCLC组织: 曲线下面积为0.916, 95%CI: 0.872~0.960;TCGA数据库: 曲线下面积为0.853, 95%CI: 0.809~0.897)。CCK8结果显示, 在A549细胞中过表达BRE-AS1后, 细胞增殖能力在24、36、48 h降低(P < 0.01);同时流式细胞术分析显示, 过表达BRE-AS1阻滞A549细胞周期于G2/M期, 并诱导细胞凋亡率上升(P < 0.05)。功能富集分析发现, 磷酸肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B (AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路与NSCLC发生发展相关(P < 0.05), 进一步Western blotting法分析发现, 过表达BRE-AS1后, A549细胞中AKT3、p-AKT3、mTOR、p-mTOR表达以及p-AKT3/AKT3、p-mTOR/mTOR均下降, PTEN表达上升, 提示过表达BRE-AS1可抑制A549细胞中PI3K-AKT-mTOR信号通路。结论BRE-AS1在NSCLC中表达下调, 具有较高诊断价值。BRE-AS1可能通过抑制PI3KAKT-mTOR信号传导途径降低A549细胞生长活力, 阻滞细胞周期, 诱导细胞凋亡, 进而影响NSCLC发生发展。

关键词：非小细胞肺癌, 长链非编码RNA, <i>BRE-AS1</i>, PI3K-AKT-mTOR信号通路, 调控机制,