千斤拔混合粉对大鼠骨结构功能的改善作用

来源：环境与职业医学杂志 2021年第3期北京时间：

作者：郭橹橹, 谢宏晨, 刘力进, 唐萌萌, 黄毅娜,

摘要：背景千斤拔作为常用中药含有丰富的异黄酮类化合物，有抗骨质疏松的潜力。然而目前对于含千斤拔成分的骨质疏松保健食品的研发甚少。目的研究一款含千斤拔的新型保健食品改善骨质疏松的效果及机制探讨。方法根据《食品安全国家标准急性经口毒性试验》的限量法进行千斤拔混合配方粉急性经口毒性试验；采用去势成年雌鼠建立骨质疏松模型，SPF级成年雌性未孕SD大鼠32只，按体重分层后随机均分为假手术组和模型组（细分为模型对照组、模型+千斤拔混合粉组和模型+面粉混合粉组）。模型对照组给予水，其余两模型组每日按10 mL·kg-1（按体重计）经口灌胃给予相应剂量的配方受试物13周。实验结束时测大鼠股骨密度、股骨干重和骨钙含量，并对股骨进行病理学检查，测骨皮质厚度。体外培养乳鼠颅骨成骨细胞，探究千斤拔提取物对其增殖分化的影响：超声波辅助提取千斤拔，以AB-8型大孔树脂进行纯化，分别得到不同梯度甲醇洗脱组分；在最佳洗脱梯度条件下，以浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g·L-1千斤拔提取液培养24、48、72 h，另设0.4 g·L-1淫羊藿苷阳性对照组和0.1% DMSO溶剂对照组。用细胞活性检测试剂盒（CCK-8）和碱性磷酸酶（ALP）测试盒（酶标仪法）分别测定成骨细胞的增殖率和ALP活性。结果急性经口毒性试验表明千斤拔混合配方粉属实际无毒级别。干预13周后，与模型对照组相比，千斤拔混合粉组和面粉混合粉组的骨密度、骨皮质厚度值均升高，差异有统计学意义（P < 0.05），且千斤拔混合粉组的骨皮质厚度（376.01±51.52）μm较面粉混合粉组（302.87±64.83）μm升高（P < 0.05）。病理组织结果显示：与模型对照组相比，千斤拔混合粉组骨小梁数目明显增多，分离度变小，骨小梁结构变紧密，且千斤拔混合粉组上述结果也明显优于面粉混合粉组。根据不同甲醇洗脱梯度下的成骨细胞ALP活性和总黄酮含量，选择60%作为千斤拔提取物最佳甲醇洗脱梯度。在此梯度下，CCK-8和ALP活性测定试验结果显示：与溶剂对照相比，对成骨细胞分别作用24 h、48 h、72 h后，不同浓度千斤拔提取物尽管对细胞有抑制增殖作用，但均具有增高ALP活性的作用（P < 0.05）。结论含千斤拔的保健品配方具有一定的改善骨功能的作用，其机制可能与促进成骨细胞的分化有关。

关键词：千斤拔, 去势大鼠, 骨质疏松, 成骨细胞, 碱性磷酸酶,