lncRNA MRAK050699对二氧化硅粉尘诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上皮-间质转换的影响

来源：环境与职业医学杂志 2021年第3期北京时间：

作者：高芳瑜, 刘煊, 田娣, 陈溪渊, 田雪艳, 焦子铭, 侯朋邑, 王发选,

摘要：背景矽肺发病机制未明且没有特效治疗方法，长链非编码RNA(lncRNA)在矽肺纤维化进程中或可发挥作用。目的探讨lncRNA MRAK050699对SiO2粉尘诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN细胞)发生上皮-间质转换(EMT)过程的影响。方法建立大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383细胞)与RLE-6TN细胞共培养体外矽肺模型，分为正常组、模型组、敲减对照组、敲减组。采用CCK8法检测NR8383细胞在10、20、40、80、160、320μg·cm-2 SiO2粉尘刺激下的活力，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测在0、20、40、80μg·cm-2粉尘刺激下的转化生长因子-β(TGF-β)含量，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测MRAK050699敲减效率。取四个6孔板，在前两个6孔板中正常培养RLE-6TN细胞24 h，后两个6孔板分别培养转染阴性对照病毒的RLE-6TN细胞24 h，和转染敲减MRAK050699病毒的RLE-6TN细胞24 h；同时在另四个6孔板中，插入Transwell小室，正常培养NR8383细胞24 h。NR8383细胞与RLE-6TN细胞铺板比例为1∶2，之后将Transwell小室连同NR8383细胞一同转入RLE-6TN细胞的6孔板中，向后三组共培养体系的Transwell小室中加入40 μg·cm-2 SiO2粉尘悬液150 μL后，四组同时继续培养24 h，取Transwell小室下室的RLE-6TN细胞置于显微镜下观察，使用Western blotting及RT-qPCR法检测E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平。结果CCK8、ELISA法结果显示SiO2剂量在40 μg·cm-2时，细胞活力下降较为明显且可保证后续实验的有效进行，上清液中TGF-β表达水平是对照组的2.94倍，可用于后续实验；敲减组MRAK050699的表达水平相比敲减对照组明显下调，敲减效率约为50%(P < 0.05)。显微镜下观察共培养后RLE-6TN细胞形态，正常组细胞呈现典型的上皮样特征，为多边形、卵圆形且紧密连接。模型组细胞呈现间质样细胞形态，表现为长梭形、纺锤形，并且细胞间隙变宽。敲减对照组与模型组类似，呈现间质细胞形态。而敲减组的细胞基本处于紧密连接状态。各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=28.11、35.72、15.26，P < 0.05；F=328.78、51.84、13.39，P < 0.05)。与正常组相比，模型组E-cadherin mRNA和蛋白表达水平分别下降32%、67%，N-cadherin mRNA和蛋白表达水平分别上升至2.28、1.64倍，α-SMA mRNA和蛋白表达水平分别上升至2.74、1.66倍(均P < 0.05)；敲减组相较于敲减对照组，E-cadherin mRNA和蛋白表达水平上升，而N-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平下降(P < 0.05)；模型组与敲减对照组的各基因mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论MRAK050699在矽肺纤维化中发挥着重要的作用，可能参与了SiO2诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT过程。

关键词：矽肺, 纤维化, 长链非编码RNA, 肺泡Ⅱ型上皮细胞, 肺泡巨噬细胞, 上皮-间质转换,