砷酸氢钠对人肝星状细胞凋亡和自噬的影响

来源：环境与职业医学杂志 2020年第10期北京时间：

作者：惠瑜, 袁艳杰, 孙立, 吴顺华,

摘要：背景肝星状细胞是肝脏主要的效应细胞，其活化被认为是促进肝纤维化发展的主要机制之一。自噬和凋亡在肝星状细胞的激活中起关键作用。目的探讨砷酸氢钠（Na2HAsO4）对人肝星状细胞（LX-2细胞）凋亡和自噬的影响。方法体外培养LX-2细胞株，使用红色荧光蛋白（RFP）-绿色荧光蛋白（GFP）-微管相关蛋白轻链3（LC3）慢病毒稳定感染LX-2细胞，采用流式细胞仪进行筛选和感染率的测定。用不同浓度Na2HAsO4（0、0.6、6、60 μmol·L-1）孵育慢病毒稳定感染的LX-2细胞，同时设立未经慢病毒感染正常培养的LX-2细胞为空白组。采用CCK-8法检测LX-2细胞活性；采用流式细胞仪检测LX-2细胞凋亡；采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测自噬指标LC3、重组人自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白P62（SQSTM-1/P62）以及凋亡指标B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）。结果RFP-GFP-LC3慢病毒稳定感染后，LX-2细胞慢病毒感染率为70%，在激光共聚焦下观察RFP和GFP的荧光强度无明显差异。Na2HAsO4处理LX-2细胞24、48、72 h后，与Na2HAsO4（0 μmol·L-1）比较，除LC3+Na2HAsO4（0 μmol·L-1）组外，其余各剂量组细胞抑制率均升高（P < 0.05）。随着Na2HAsO4染毒剂量的增加，凋亡率呈上升趋势，且与Na2HAsO4（0 μmol·L-1）组相比，差异均有统计学意义（P < 0.05）。各组间LC3（F=5.64，340.66）、Beclin-1（F=20.59，87.70）、SQSTM-1/P62（F=15.91，107.24）、BCL-2（F=113.29，9.41）mRNA和蛋白表达水平差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论Na2HAsO4可诱导LX-2细胞发生细胞凋亡和自噬，凋亡和自噬之间可能存在拮抗作用。

关键词：砷, 肝星状细胞, 凋亡, 自噬,