镉致肾细胞损伤中氧化应激及N6-甲基腺苷修饰酶表达变化

来源：环境与职业医学杂志 2020年第9期北京时间：

作者：何作顺, 李萌竹, 谷仕艳,

摘要：背景N6-甲基腺苷（m6A）修饰酶可参与细胞损伤过程，但m6A修饰酶在镉引起肾细胞损伤中有何变化尚不清楚。目的观察CdSO4致肾小管上皮细胞（HK-2细胞）损伤过程中m6A修饰酶的变化水平。方法以不同浓度CdSO（4 0、4、8、16 μmol·L-1）处理HK-2细胞24 h后对相应指标进行检测。用Hoechst染色法观察细胞凋亡水平，镜下随机选取视野计数正常细胞和凋亡细胞，计算细胞凋亡率，利用相应试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性、丙二醛（MDA）含量，以蛋白免疫印迹法检测m6A甲基转移酶中的甲基转移酶样3（METTL3）和脂肪量与肥胖相关蛋白（FTO）的蛋白表达水平，荧光定量PCR法检测YTH结构域家族蛋白1（YTHDF1）和YTH结构域家族蛋白3（YTHDF3）的mRNA水平。结果经0、4、8、16μmol·L-1 CdSO4处理后，细胞凋亡率依次为6.83%、5.17%、21.17%、35.80%；4、8、16 μmol·L-1组SOD活性依次是（15.41±0.96）、（13.57±1.42）、（10.96±0.61）×103 U·g-1，与"0"组相比，各组均有降低（P < 0.05）。GSH-PX活性在CdSO4浓度为8 μmol·L-1时降低至（8.74±3.91）U·g-1，而在8、16 μmol·L-1 CdSO4作用时，MDA含量分别升高至（87.69±3.05）、（93.42±4.71）μmol·g-1（P < 0.05）。蛋白免疫印记结果显示，METTL3蛋白相对表达水平在4、8、16 μmol·L-1时分别升高至"0"组的1.09、1.25、1.33倍，FTO蛋白相对表达水平在8、16 μmol·L-1时分别为0.81和0.74（P < 0.05）。在CdSO4浓度为4 μmol·L-1时，YTHDF1的mRNA水平是"0"组的7.62倍，YTHDF3的mRNA水平在4、16 μmol·L-1 CdSO4作用时是"0"组的2.65、2.26倍（P < 0.05）。结论在CdSO4致HK-2细胞发生损伤过程中，m6A修饰酶METTL3和FTO的蛋白水平以及YTHDF1和YTHDF3的mRNA水平发生不同程度的变化。

关键词：HK-2细胞, 氧化应激, 甲基转移酶, 去甲基化酶, 甲基结合蛋白,