双酚A对大鼠胰岛素瘤细胞凋亡及胰岛素分泌水平的影响

来源：环境与职业医学杂志 2020年第6期北京时间：

作者：李丽萍, 王乐, 德小明, 李玲, 张亚娟, 朱丽敏,

摘要：背景双酚A(BPA)是一种典型的具有拟雌激素作用的环境内分泌干扰物。越来越多的研究显示，BPA暴露与人类2型糖尿病(T2DM)发生呈正相关，但其作用机制尚不清楚。探讨BPA对糖代谢的影响具有非常重要的意义。目的探讨双酚A对大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)凋亡及胰岛素分泌水平的影响。方法常规培养INS-1细胞，待细胞贴壁后，用含不同浓度BPA(6、30、150 μmol·L-1)的RPMI 1640培养基进行染毒，以DMSO为溶剂(终浓度≤ 0.1%)。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测BPA对INS-1细胞存活率的影响；流式细胞术检测BPA对INS-1细胞凋亡率的影响；活性氧(ROS)试剂盒检测BPA染毒对INS-1细胞ROS水平的影响；葡萄糖刺激胰岛素分泌实验检测不同浓度BPA对INS-1细胞胰岛素分泌的影响；荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法分别检测BPA对INS-1细胞Bcl-2、Bax、半胱天冬酶(caspase)3基因及其蛋白表达水平的影响。结果与DMSO溶剂对照组比较，30 μmol·L-1 BPA组INS-1细胞存活率增高，150 μmol·L-1 BPA组细胞存活率降低(P < 0.01)。流式细胞术检测结果显示：6、150μmol·L-1 BPA组INS-1细胞总凋亡率增高(均P < 0.05)。6、30、150 μmol·L-1 BPA组INS-1细胞内ROS含量增加(均P < 0.05)。葡萄糖刺激胰岛素分泌实验结果显示：在基础浓度葡萄糖(5.6 mmol·L-1)刺激下，6、30 μmol·L-1 BPA组INS-1细胞胰岛素分泌水平增高(均P < 0.05)，150 μmol·L-1 BPA组胰岛素分泌水平下降(P < 0.01)，而在高浓度葡萄糖(16.7 mmol·L-1)刺激下，30 μmol·L-1 BPA组胰岛素分泌水平增高(P < 0.05)，6、150 μmol·L-1 BPA组胰岛素分泌水平下降(均P < 0.05)。抑制凋亡基因Bcl-2的mRNA及蛋白相对表达水平在6、150 μmol·L-1 BPA组降低，在30 μmol·L-1 BPA组增高(均P < 0.05)；促进凋亡基因Bax的mRNA和蛋白相对表达水平在150 μmol·L-1 BPA组增高(均P < 0.05)；caspase3的mRNA和蛋白相对表达水平在150 μmol·L-1BPA组增高，在30 μmol·L-1BPA组降低(均P < 0.05)；Bcl-2与Bax的mRNA和蛋白相对表达比值在6、150 μmol·L-1 BPA组降低(均P < 0.05)；cleaved-caspase3与caspase3蛋白相对表达水平比值在6、150 μmol·L-1 BPA组增高(均P < 0.05)。结论30 μmol·L-1BPA对INS-1细胞具有一定的促进增殖作用，对INS-1细胞胰岛素分泌水平也具有促进作用；6、150 μmol·L-1BPA可降低INS-1细胞活力，诱导INS-1细胞凋亡，降低胰岛素分泌水平，其作用机制可能与氧化损伤有关。

关键词：双酚A, INS-1细胞, 细胞凋亡, <i>Bcl-2</i>, <i>Bax</i>, <i>caspase3</i>, <i>cleaved-caspase3</i>,