诱导痰中巨噬细胞碳含量的定量方法

来源：环境与职业医学杂志 2020年第6期北京时间：

作者：刘元升, 李建宇, 管鸽, 曹雪, 蒋梦会, 祝肖肖, 魏禄堂, 冷曙光, 郑玉新,

摘要：背景 巨噬细胞碳含量作为颗粒物内暴露的新型生物标志物可通过诱导痰获得。当前分子流行病学研究中诱导痰保存尚无有效方法，并且诱导痰中巨噬细胞碳含量的定量方法国内尚无报道。将此标志物应用于含碳颗粒物暴露需要进行方法的标准化研究和验证。 目的 探究并建立新鲜诱导痰液新型保存方法和诱导痰中巨噬细胞碳含量定量方法。 方法 选择无特殊职业有害因素暴露的自来水厂工人作为一般人群（n=169）进行诱导痰中碳含量方法学验证和影响因素研究。受试者吸入超声雾化的4.5%高渗盐水并咳出痰液，向痰液中加入约20~30 mL的Saccomanno固定液倒转摇匀，置于阴凉避光处保存。待返回实验室用痰消化液消化痰液，杜氏磷酸缓冲液清洗，离心获得纯细胞悬液。血涂片法涂片，Diff-quick快速染液固定染色。使用光学显微镜在物镜100倍放大并加香柏油对每份样本随机选取的50个形态完好的巨噬细胞拍照，并通过Image J软件处理照片进行巨噬细胞碳含量定量：在挖去细胞核之后，转换灰度使照片呈黑白色，并根据每个细胞染色情况特异性调整灰度值，以保证能计算出细胞中所有的碳颗粒。 结果 用Saccomanno固定液保存的新鲜诱导痰液，经处理后，镜下观察视野杂质少，细胞形态学完整，核质清晰，细胞核呈蓝紫色，胞浆呈淡粉红色或浅蓝色，细胞核偏于一侧呈圆形或肾形，胞浆内黑色碳颗粒清晰可见，大多呈小团块聚集分布，可进行巨噬细胞碳含量定量。诱导痰成功率在无职业颗粒物暴露的一般人群中为63.3%，性别不会影响痰液诱导成功率。采用巨噬细胞碳面积与巨噬细胞胞浆面积比（the proportion of cytoplasm area occupied by carbon particles，PCOC）的中位数作为个体巨噬细胞碳含量的读数，一般人群巨噬细胞碳含量的M（P25，P75）为0.83%（0.63%，1.34%），男性为0.79%（0.59%~1.27%），女性为0.95%（0.75%~1.34%）。 结论 本研究方法方便、可靠、高效，可用于诱导痰标本保存并开展大规模的基于诱导痰的巨噬细胞碳含量测定工作。

关键词：Saccomanno固定液, 诱导痰, 保存方法, 气道巨噬细胞碳含量, 暴露水平,