G9a在砷致HaCaT细胞DNA损伤中的作用初探

来源：环境与职业医学杂志 2019年第5期北京时间：

作者：丁雪娇, 张安柳, 李昌哲, 赵华, 李军,

摘要：背景 砷可导致皮肤癌、肺癌等，相关机制存在多种假说。有研究认为DNA损伤及其修复抑制在砷的毒作用机制中起重要作用。本课题组前期在人群研究中也发现砷暴露可引起外周血淋巴细胞DNA双键断裂损伤。因此，探讨砷暴露引起细胞DNA损伤的分子机制对研究砷致癌机制尤为重要。 目的 通过检测人永生化皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）组蛋白赖氨酸甲基转移酶2（G9a）过表达前后NaAsO2所致细胞DNA损伤，初步探讨G9a与砷致HaCaT细胞DNA损伤修复关系。 方法 体外常规培养HaCaT细胞，以0.00、2.50、5.00、10.00 μmol/L NaAsO2处理HaCaT细胞24 h，其中0.00 μmol/L为空白对照组。采用实时荧光定量PCR法检测G9a mRNA转录水平，免疫印迹法检测G9a蛋白表达水平，单细胞凝胶电泳法检测各组HaCaT细胞DNA损伤水平。为了进一步验证G9a对NaAsO2致细胞DNA损伤的影响，用pCDNA3.1-G9a质粒瞬时转染HaCaT细胞的基础上，再以0.00 μmol/L或10.00 μmol/L NaAsO2处理细胞24 h，另设立空白对照组、空载体转染组和单独染砷组（10.00μmol/L），采用上述实验方法检测各项指标的变化。 结果 用不同浓度NaAsO2染毒HaCaT细胞24 h后，实时荧光定量PCR结果显示，与空白对照组（1.00±0.00）比较，2.50、5.00、10.00 μmol/L染砷组G9a mRNA转录水平（0.87±0.04、0.70±0.05、0.59±0.04）逐渐减低（P 2浓度增加而逐渐增加（r=0.93、0.95，P G9a高表达组G9a mRNA的转录水平（105.93±28.72）及蛋白表达水平（1.07±0.06）均明显增加（P G9a高表达联合染砷组G9a mRNA的转录水平（41.80±7.14）及蛋白表达水平（0.67±0.02）也有所升高（P G9a高表达组细胞的彗星尾部DNA百分含量（1.00±0.18）及Olive尾矩（0.77±0.13）无明显变化，与染砷组（11.41±1.02、12.59±1.38）比较，G9a高表达联合染砷组细胞彗星尾部DNA百分含量及Olive尾矩（15.24±1.25、17.12±2.88）有所升高（P 结论 砷可导致HaCaT细胞DNA损伤和G9a mRNA转录水平及蛋白表达水平的改变，但还不确定G9a的变化是否与砷所致DNA损伤机制有关联，其机制有待进一步研究。

关键词：砷, HaCaT细胞, 组蛋白赖氨酸甲基转移酶2 G9a, DNA损伤,