微小RNA-218通过靶向调控LASP1影响食管癌细胞的生物学行为

来源：环境与职业医学杂志 2019年第3期北京时间：

作者：郑雨虹, 马月, 张颖, 赵超, 刘冉, 浦跃朴, 尹立红,

摘要：目的 微小RNA-218（miR-218）作为一种肿瘤抑制因子，参与多种肿瘤的发生与进展。肌动蛋白骨架蛋白1（LASP1）是一种新的肌动蛋白结合蛋白，参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移，与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。食管癌细胞中miR-218与LASP1基因间的调控关系尚未有报道，本研究对食管癌细胞中miR-218是否可以通过靶向调控LASP1而发挥抑癌作用进行初步探讨。 方法 应用实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3株食管癌细胞（EC109、EC9706、KYSE510）和1株永生化食管上皮细胞（Het-1A）中miR-218的表达水平。以EC109为靶细胞，分别转染miR-218模拟物（miR-218 mimic）、miR-218 mimic的空载体对照（miR-NC）、LASP1的小干扰RNA（si-LASP1）、miR-218 mimic和si-LASP1（miR-218 mimic+si-LASP1）以及si-LASP1的空载体对照（si-NC）。采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞的转染效果，采用细胞增殖与毒性检测试剂盒观察各组细胞生长曲线，采用细胞平板克隆形成实验、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡，通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验对miR-218的靶基因进行预测及验证。 结果 KYSE510、EC109和EC9706中miR-218表达水平分别为Het-1A的0.32%、1.81%和2.15%（均P LASP1的3'非编码区有miR-218的结合位点，miR-218 mimic转染组EC109中LASP1 mRNA表达水平是miR-NC转染组的28.20%（P LASP1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验结果显示LASP1-WT（野生型）+miR-218 mimic组的荧光素酶活性为0.31±0.02，低于LASP1-WT+miR-NC组（0.56±0.04）和LASP1-MUT（突变型）+miR-218 mimic组（0.49±0.07）（均P P P LASP1的EC109观察到相同的结果趋势。与si-LASP1单独转染组比较，miR-218 mimic和si-LASP1共转染组细胞生长速率下降，平板克隆形成率降低（P P P 结论 miR-218在食管癌细胞中低表达；在EC109中miR-218可通过直接靶向调控LASP1基因的表达，抑制细胞的增殖、迁移和侵袭，促进凋亡，从而在食管癌的发展进程中发挥抑癌作用。

关键词：食管癌, miR-218, <i>LASP1</i>, 增殖, 迁移, 侵袭, 凋亡,