荧光转基因斑马鱼Tg(ere-vtg：egfp)质粒的构建及验证

来源：环境与职业医学杂志 2017年第6期北京时间：

作者：孙冰, 许慧慧, 夏敏杰, 丁训城, 胡晶莹, 李卫华,

摘要：目的 本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol，EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型，提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens，EEs)污染程度的生物检测方法。 方法 构建Tg(ere-vtg：egfp)质粒，显微注射到1~2个细胞期的斑马鱼胚胎中，经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光，建立能稳定遗传的Tg(ere-vtg：egfp)转基因斑马鱼系。将转基因斑马鱼纯合子幼鱼和胚胎暴露于不同浓度的EE2进行敏感性鉴定，并将转基因斑马鱼纯合子幼鱼暴露于多种EEs、雌激素结构类似物中进行特异性鉴定。 结果 经显微注射Tg(ere-vtg：egfp)质粒并进行基因筛选，成功构建Tg(ere-vtg：egfp)转基因斑马鱼。EE2诱导Tg(ere-vtg：egfp)转基因斑马鱼表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)与浓度、时间有关。当EE2质量浓度大于0.1 ng/L(131 hpf)时，可见转基因斑马鱼胚胎表达明显的GFP。当暴露于不同结构的雌激素类化合物时，Tg(ere-vtg：egfp)转基因斑马鱼幼鱼呈现GFP表达，而对于非雌激素类化合物在各浓度下均没有GFP表达。 结论 采用Tg(ere-vtg：egfp)转基因斑马鱼可直观地动态监测环境中EEs污染情况。

关键词：环境雌激素, 转基因斑马鱼, 卵黄蛋白原, 绿色荧光蛋白, 环境监测,