煤尘致人胚肺成纤维细胞纤维化中胸腺分化抗原-1 DNA甲基化的变化

来源：环境与职业医学杂志 2016年第8期北京时间：

作者：魏丛慧, 王瑶, 王凯, 王和静, 张庆锋, 刘志宏,

摘要：目的观察煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化改变过程中，胸腺分化抗原-1（Thy-1）表达及其DNA甲基化变化。方法用含500 nmol/L佛波酯的1640培养液培养人单核细胞，24 h诱导分化后成巨噬细胞；收集100 μg/mL煤尘刺激巨噬细胞24 h的培养上清，再刺激MRC-5 24、48、72 h，对照组分别为正常巨噬细胞和正常人胚肺成纤维细胞。酶联免疫分析法测定巨噬细胞上清液中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平和MRC-5中TGF-β1蛋白表达水平，实时荧光定量PCR法检测胶原蛋白-Ⅰ、胶原蛋白-Ⅲ、α-SMA、Thy-1、DNA甲基化转移酶（DNMTs）1、3a、3b mRNA的表达，巢式降落式特异性PCR检测Thy-1DNA甲基化。结果煤尘组巨噬细胞上清中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平与对照组比较明显增加（5.542±0.953）ng/mL vs（2.498±0.456）ng/mL，（462.435±56.620）ng/L vs（329.971± 17.911）ng/L（P < 0.05）；巨噬细胞染尘后上清刺激MRC-5 24、48、72 h，TGF-β1蛋白表达（223.813±5.723），（263.757± 17.254），（326.720±11.263）ng/L和胶原蛋白Ⅰ mRNA表达（3.38±0.37，3.87±0.28，4.40±0.10）、胶原蛋白Ⅲ mRNA表达（1.65±0.12，2.37±0.19，2.66±0.28）、α-SMA mRNA表达（2.41±0.47，4.76±0.10，4.23±0.63）均升高；且均存在时间效应关系，r值分别为0.965，0.876，0.899，0.667（P < 0.05）；煤尘组MRC-5中Thy-1mRNA表达均低于对照组，随着巨噬上清液作用时间的增加，其表达逐渐降低（0.634±0.014，0.448±0.055，0.352±0.044），呈负相关（r=-0.945，P < 0.05）；煤尘组MRC-5中DNMTs mRNA表达均较对照组升高（DNMT1：1.57±0.12，2.51±0.33，7.00±0.71；DNMT3a：0.74± 0.09，2.89±0.52，3.31±0.53；DNMT3b：1.46±0.18，2.25±0.44，5.33±0.16），且均存在时间效应关系，r值分别为0.924，0.890，0.937（P < 0.05）；煤尘组Thy-1 DNA甲基化水平较对照组升高（0.506±0.014，0.536±0.017，0.570±0.032），存在时间效应关系（r=0.682，P < 0.05）。结论煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞纤维化发生，在此过程中Thy-1 DNA发生甲基化，Thy-1mRNA表达降低，可能是煤尘致肺纤维化发生的重要表观遗传机制之一。

关键词：煤尘, 单核细胞源性巨噬细胞, 人胚肺成纤维细胞, 纤维化, 胸腺分化抗原-1, DNA甲基化,