小菜蛾PGRP-SA的体外表达及介导酚氧化酶活力的研究

来源：环境昆虫学报杂志2016年第3期北京时间：

作者：张玉清，许小霞，郑志华，余静，高延富，欧阳莉娜，金丰良*

单位：（华南农业大学农学院昆虫学系 广东省生物农药创制与应用重点实验室

摘要：肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan Recognition Proteins, PGRPs)是可以识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的一类模式识别受体，在介导酚氧化酶级联反应中起着重要的作用。本研究以实验室克隆的小菜蛾PxPGRP SA （GenBank No.EU399240）为基础，RT-PCR克隆了其开放阅读框（ORF），在原核细胞中获得了高效重组表达，利用GST一步纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔，制备了抗血清，滴定效价为1∶51200。Western blot检测表明Micrococcus luteus和Serratia marcescens可以显著提高PxPGRP-SA在小菜蛾血淋巴中的含量。为了检测PxPGRP-SA与酚氧化酶PO的活力关系，本研究将PxPGRP-SA连接到真核表达载体pMT/Bip/V5/HisA构建真核表达质粒pMTAPGRP，转染果蝇S2细胞中，获得稳定的细胞系，硫酸铜诱导获得表达后用anti-V5纯化获得重组蛋白PxPGRP-SA。将重组蛋白PxPGRP-SA与M. luteus 和S. marcescens分别温育后，可以显著提高小菜蛾血浆中PO的活力。本研究结果阐明了重组蛋白PxPGRP-SA在小菜蛾体PO级联反应中的功能，为进一步研究PxPGRP-SA在小菜蛾体内免疫信号通路中的功能奠定了基础。

关键词：小菜蛾,肽聚糖识别蛋白,酚氧化酶,细胞表达,

基金资助：国家自然科学基金（30900943，1071734）；广州市科技计划项目（201509010023）