孟氏隐唇瓢虫qRT-PCR分析中内参基因的筛选

来源：环境昆虫学报杂志2016年第2期北京时间：

作者：潘畅，张宇宏，庞虹*

单位：（1 有害生物控制与资源利用国家重点实验室 中山大学生命科学学院,2 广东省昆虫研究所 广东省农业害虫综合治理重点实验室

摘要：选择合适的内参基因是qRT-PCR研究的关键。本文以孟氏隐唇瓢虫Cryptolaemus montrouzieri ouzieri Mulsant为研究材料，利用qRT-PCR技术，对孟氏隐唇瓢虫4个候选内参基因Actin、RPS23、GAPDH和β-tubulin的mRNA的表达量进行了分析，并用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件分析它们在孟氏隐唇瓢虫不同发育阶段及成虫不同组织中的表达稳定性。结果表明，以成虫不同组织为材料时，综合三种软件分析结果显示4个候选基因表达稳定性平均等级值排名为RPS23(rank=1)>β-tubulin(rank=2.3)>GAPDH(rank=3)>Actin(rank=3.7)，以不同发育时期虫体为材料时，综合分析结果显示4个候选内参基因表达稳定性平均等级值排名为RPS23(rank=1.7)>Actin(rank=2)>GAPDH(rank=2.7)>β-tubulin(rank=3.7)。综合分析在瓢虫不同发育阶段及成虫不同组织两种处理下，三种软件的评价效果，4个候选基因表达稳定性等级值的总平均排名为RPS23(rank=1.3)>Actin(rank=2.8)=GAPDH(rank=2.8)>β-tubulin (rank=3)。RPS23在瓢虫不同发育阶段及成虫不同组织中均显示出较高的表达稳定性及与其它基因之间极大的相关性，可以确定为孟氏隐唇虫不同发育阶段及成虫不同组织基因表达分析中一个稳定表达的基因，可作为单个内参基因或者其它内参基因的协同基因，本实验为开展孟氏隐唇瓢虫功能基因表达分析奠定了方法学基础。

关键词：孟氏隐唇瓢虫,qRT-PCR,内参基因,表达稳定性,GeNorm软件,NormFinder软件,BestKeeper软件,

基金资助：国家重点基础研究发展计划（973）项目（2013CB127600）；国家自然科学基金面上项目（31171899，31572052）；国家自然科学基金项目（31301720）