烟粉虱MED隐种气味结合蛋白基因 BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA克隆及原核表达

来源：环境昆虫学报杂志2017年第4期北京时间：

作者：谢红艳，万鲁长，黄春燕，刘国霞，Jean-Francois Picimbon，宫志远

单位：1.山东省农业科学院农业资源与环境研究所 农业部废弃物基质化利用重点实验室,2.山东省农业科学院生物技术研究中心

摘要：采用RT-PCR和RACE技术成功克隆烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius)气味结合蛋白（odorant binding protein, OBP）基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA全长。BtabOBP2（GenBank 登录号：AIS71883）和BtabOBP4（GenBank 登录号：AIS71884）的cDNA序列全长分别为1107 bp和874 bp，完整开放阅读框（ORF）分别为744 bp和429 bp，分别编码247和142氨基酸，BtabOBP4有6个保守的半胱氨酸，属于典型OBP，而BtabOBP2除了具有典型OBP的6个半胱氨酸，增加了3个保守的半胱氨酸，属于Plus-C OBP。将得到的BtabOBP2和BtabOBP4重组到原核表达载体pET30a(+)，转化入BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞，用IPTG诱导融合蛋白表达。采用亲和层析和凝胶过滤层析纯化融合蛋白，并进行Western blot 分析。结果显示，BtabOBP2和BtabOBP4融合蛋白在大肠杆菌中均有可溶性表达，Western blot 结果证实所表达的融合蛋白确实为目的蛋白。BtabOBP2融合蛋白在SDS-PAGE中的表观分子量比预测的分子量大了6.53 kDa，用重组肠激酶切掉6×His标签后，目的蛋白的表观分子量与预测分子量相近，偏差降低，说明6×His标签是造成融合蛋白表观分子量偏差的原因。本研究明确了烟粉虱气味结合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的核苷酸、氨基酸序列特征，并成功进行了原核表达和纯化，为进一步研究这两个OBP基因的分子结构和功能奠定了基础。

关键词：烟粉虱,气味结合蛋白,基因克隆,原核表达,纯化,

基金资助：山东省农业科学院青年科研基金（2015YQN36）；山东省博士后创新项目专项资金（201203025）；山东省农业科学院农业科技创新工程（CXGC2017A01）山东省现代农业产业技术体系食用菌创新团队建设项目（SDAIT-07-01）