中华蜜蜂气味受体基因AcerOr1 RNA最佳干扰片段的筛选

来源：环境昆虫学报杂志2020年第5期北京时间：

作者：郭丽娜，赵慧婷，任有蛇，徐兵，姜玉锁

单位：1.山西农业大学动物科技学院,2.山西农业大学生命科学院,3. 山西农业大学工学院

摘要：为了更好地筛选出中华蜜蜂气味受体基因AcerOr1有效干扰序列，本研究以中华蜜蜂气味受体基因AcerOr1为靶标，分别选取3个片段AcerOr1-1（429 bp）、AcerOr1-2（218 bp）和AcerOr1-3（543 bp），并构建相应的dsRNA表达载体，获取dsRNA后通过单只饲喂进行体内RNAi实验，运用qPCR和Western从mRNA水平和蛋白水平检测干扰效率。实验结果显示：片段大小429 bp组dsAcerOr1-1和对照组mRNA表达量之间不具有显著的统计学差异（P＞0.05），片段大小为218 bp的dsAcerOr1-2组和片段大小为543 bp的dsAcerOr1-3组对AcerOr1表达量都有显著的抑制（P＜0.05），抑制率分别为88.85%±0.12%和69.16%±1.06%，以片段大小为218 bp的dsAcerOr1-2干扰效果最佳。Western blot结果显示：与mRNA表达水平检测结果一致，饲喂dsAcerOr1-1 AcerOr1蛋白的表达量与对照组差异不显著（P＞0.05），而饲喂dsAcerOr1-2和dsAcerOr1-3后AcerOr1蛋白的表达量均受到显著抑制（P＜0.05）。本试验成功构建AcerOr1基因干扰载体，最终确定218 bp的dsAcerOr1-2为最佳干扰片段，证实其能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达，为进一步研究该基因的体内外功能奠定了基础。

关键词：中华蜜蜂,AcerOr1基因,RNA干扰,

基金资助：山西农业大学校青年科技创新（J141902180）；山西省“省1331”高校科技创新（J241942004）；优秀博士来晋奖励（K271899063）