家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin15的克隆表达及重组蛋白的体外活性分析

来源：环境昆虫学报杂志2021年第3期北京时间：

作者：杜敏，池骋，张涛，黄兰英，杨慧，国果，吴建伟，尚小丽

单位：1. 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室,2. 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心

摘要：为探明家蝇重组Serpin15蛋白的体外活性和酶稳定性，本文对家蝇 Serpin15 基因进行了生物信息学分析和克隆表达，并对纯化后的家蝇重组Serpin15蛋白进行了酶特性的研究。结果显示：家蝇 Serpin15 基因ORF框全长为1 353 bp，编码450个氨基酸，理论分子量为51 076.63 Da，有信号肽和一个标志抑制活性的功能结构域RCL反应环；成功构建原核表达载体pET-28a(+)-Serpin15，经诱导表达和纯化获得家蝇重组Serpin15蛋白；重组蛋白酶特性研究发现，家蝇重组Serpin15蛋白对胰蛋白酶有极显著的抑制作用，此外，将重组Serpin15蛋白经20~60℃热处理15 min，或经pH 6~10过夜处理，或经50℃和pH 8处理后室温存放15~90 min，重组蛋白的胰蛋白酶抑制活性均仍大于70%。研究结果为家蝇Serpin15蛋白的免疫功能研究奠定了重要实验基础，也为有害昆虫杀虫剂的研发提供思路。

关键词：家蝇,Serpin15基因,原核表达,抑制活性,酶稳定性,

基金资助：国家自然科学基金（A2013-14）；贵州省科技合作计划（黔科合LH字[2015]7328）；贵州医科大学学术新苗培养及创新探索专项（19NSP062）；国家自然科学基金（81760647）