家蚕BmChd64基因的克隆与表达定位分析

来源：环境昆虫学报杂志2022年第4期北京时间：

作者：魏秋兰，吴琼芳，邓惠敏，朱子丹

单位：华南师范大学生命科学学院 华南师范大学昆虫科学与技术究所

摘要：Chd64是含有钙结合蛋白同源（Calponin homology，CH）结构域的蛋白，在果蝇蜕皮激素与保幼激素信号通路中发挥重要作用。本研究以家蚕Bombyx mori为研究对象，利用PCR克隆了与果蝇Drosophila melanogaster DmChd64同源的BmChd64基因，与表达载体pET-28a连接后，成功获得体外原核表达的BmChd64蛋白，并对其进行了亚细胞定位分析。家蚕BmChd64基因开放阅读框（ORF）的序列为567 bp，编码188个氨基酸，预测分子量大小为20.9 kDa，理论等电点为8.41，编码的蛋白在第27~130个氨基酸处存在CH结构域。同源性比对与进化分析显示，BmChd64与赤拟谷盗Tribolium castaneum和果蝇的Chd亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示，BmChd64在家蚕5龄游走期的不同组织中均有表达，且在翅原基中的表达趋势与家蚕体内蜕皮激素（20-hydroxyecdysone，20E）滴度变化规律一致。亚细胞定位结果显示，BmChd64在细胞核与细胞质中均有分布，细胞核内荧光信号较强，且在细胞核外围较弱，推测细胞质中BmChd64也可入核，最终定位在细胞核中。研究结果表明BmChd64可能主要通过20E信号通路调控翅原基等的变态发育，这为进一步完善20E调控昆虫变态发育的分子机制提供了实验基础。

关键词：家蚕,BmChd64,蜕皮激素,表达分析,亚细胞定位,

基金资助：广东省自然科学杰出青年基金（2017A030306003）；国家自然科学基金面上项目（31872969）