桉蝙蛾幼虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选

来源：环境昆虫学报杂志2023年第4期北京时间：

作者：陈晓，邱峙嵩，苏小燕，许原，曹丽沙，杨振德，胡平

单位：广西大学林学院

摘要：本研究通过筛选桉蝙蛾Endoclita signifer Walker幼虫不同龄期与不同体节中稳定表达的内参基因，为桉蝙蛾基因表达研究提供参考。通过实时荧光定量PCR技术测定5个候选内参基因（ACTIN、GAPDH、TUB、RIB、EF）在桉蝙蛾幼虫不同龄期（3龄、5龄、9龄、12龄）与不同体节（头部、胸部、腹部）及全样品（由所有样品组成）处理中的表达量，后利用GeNorm、NormFinder、BestKeeper对5个候选基因的稳定性进行评估，最后由RefFinder综合分析结果，选出最佳的内参基因。基于4种分析方法的评估可知，桉蝙蛾5龄和9龄幼虫的不同体节、不同龄期幼虫的头部和胸部中内参基因的最佳数目为2，而3龄和12龄幼虫的不同体节、不同龄期幼虫的腹部及全样本中内参基因的最佳数目为3。3龄、5龄、9龄和12龄幼虫的不同体节中可分别选择ACTIN+RIB+GAPDH、EF+RIB、GAPDH+EF和ACTIN+RIB+GAPDH作为最稳定的内参基因组合；EF+RIB、RIB+GAPDH和EF+GAPDH+ACTIN可分别作为不同龄期幼虫头部、胸部和腹部的最佳内参基因组合；综合考虑桉蝙蛾幼虫不同龄期与不同体节的影响时，可选择RIB、ACTIN和GAPDH作为内参基因。

关键词：桉蝙蛾,幼虫,龄期,体节,内参基因,RT-qPCR,

基金资助：广西壮族自治区科技基地和人才专项（2020AC19057）；广西壮族自治区自然科学基金面上项目（2020JJA130068）；国家自然科学基金青年科学基金（32001321）