细菌侵染后赤拟谷盗幼虫实时荧光定量PCR内参基因的表达稳定性评估

来源：环境昆虫学报杂志2026年第3期北京时间：

作者：邓宝林，马慧杏，李春燕，李宝琪，刘吉升

单位：广州大学生命科学学院

摘要：实时定量RT-PCR（qRT-PCR）是进行基因表达水平分析的一种常用技术手段，选择在试验条件下表达相对稳定的内参基因是数据标准化的关键。【目的】本试验旨评估不同细菌侵染后赤拟谷盗Tribolium castaneum幼虫的候选内参基因的表达稳定性，为后续赤拟谷盗的基因表达分析奠定基础。【方法】对赤拟谷盗幼虫进行革兰氏阴性菌大肠杆菌Escherichia coli和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的喂食侵染，通过qRT-PCR检测ACTB、CAD、RpL13A、RpL32、RpS3、RpS6、RpS18和Syx1A等8个候选内参基因在不同组织中和不同侵染时间点的相对表达水平；并利用ΔCq、geNorm、NormFinder和BestKeeper综合评估候选内参基因的表达稳定性。【结果】根据qRT-PCR结果，在不进行细菌侵染的对照组中，RpS3和RpL32是最稳定的内参基因；大肠杆菌侵染时，RpS3和RpL32是最稳定的基因，Syx1A和ACTB是较稳定的基因；金黄色葡萄球菌侵染时，RpS3、RpL32和Syx1A是最稳定的基因。综合结果显示，两种细菌侵染后不同组织中，RpS3和RpL32是表达最稳定的两个基因，而CAD的表达稳定性最差。【结论】在细菌侵染赤拟谷盗幼虫的qRT-PCR试验中，推荐使用RpS3和RpL32作为内参基因，Syx1A和ACTB也可以作为候选内参基因。

关键词：赤拟谷盗,内参基因,实时荧光定量PCR,表达稳定性,

基金资助：国家自然科学基金（31501898）；广州大学校级大学生创新创业训练项目（XJ202411078128）；广州大学第十九届“挑战杯”学术科技竞赛（2024TZBNAI1609）；第六届广州大学生命科学学院“科创杯”大赛（SKYKCB20240312，SKYKCB20240313）