苹果蠹蛾胚胎细胞系的建立及其颗粒体病毒的离体复制

来源：环境昆虫学报杂志2026年第3期北京时间：

作者：姚昱帆，张小雨，李长友，孟祥谦，于乾龙，李洁，万方浩，褚栋，郑桂玲

单位：1. 青岛农业大学植物医学学院 山东省植物病虫害绿色防控工程研究中心,2. 中国农业科学院深圳农业基因组研究所

摘要：【目的】昆虫细胞系是生物学、生理学和病毒学等研究领域的重要工具，苹果蠹蛾 Cydia pomonella是一种具有毁灭性危害的入侵性害虫，目前国内尚未有苹果蠹蛾细胞系的报道。【方法】本研究以苹果蠹蛾卵为材料建立胚胎细胞系，从中筛选对苹果蠹蛾颗粒体病毒（Cydia pomonella granulovirus, CpGV）敏感的细胞系，研究细胞系的核型和生长等生物学特性，通过实时荧光定量PCR（qPCR）和透射电子显微镜技术分析CpGV在细胞系中的离体复制。【结果】本研究成功建立了8个苹果蠹蛾胚胎细胞系，可在含10%胎牛血清的TNM-FH培养基中稳定传代；筛选获得1个对CpGV敏感的细胞系QAU-Cp-E-11-L，QAU-Cp-E-11-L细胞为贴壁生长，圆形、梭形和棒状细胞的比例分别为90.0%、7.5%和2.5%；扩增的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基（COI）基因片段长度为576 bp，经Blast比对与苹果蠹蛾COI基因核苷酸序列的相似性为100%，证实该细胞系源自苹果蠹蛾；QAU-Cp-E-11-L细胞染色体数目为23~440条，染色体异倍化现象明显；QAU-Cp-E-11-L在培养168 h 时细胞数量达到最大值2.27 × 106 cells/mL，群体倍增时间为33.81 h；CpGV接种QAU-Cp-E-11-L细胞，qPCR检测到CpGV在细胞内复制，12 d达到最高值2.48 × 108 copies/μg DNA，通过透射电子显微镜可以观察到CpGV包涵体在细胞内形成，随着感染时间的增加，细胞质内病毒包涵体数量增多。【结论】本研究建立的苹果蠹蛾细胞系丰富了昆虫细胞系资源，可用于颗粒体病毒与宿主相互关系的深入研究。

关键词：苹果蠹蛾,细胞系,线粒体 COI基因,颗粒体病毒,离体复制,

基金资助：国家重点研发计划（2021YFD1400200）