卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用

来源：湖北农业科学杂志2020年第15期北京时间：

作者：向冬梅1,2, 易思宇1,3, 唐青海1, 吴思雯1, 王姝姝1, 李彦1, 黎露1, 韩涛涛1

单位：1.衡阳师范学院生命科学与环境学院/衡阳师范学院畜禽养殖生物工程技术研究所,湖南 衡阳 421008; 2.青岛农业大学生命科学学院,山东 青岛 266109; 3.广西大学动物科学技术学院,南宁 530004

摘要：为了得到较优的卵黄抗体提取工艺,试验改良了辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法与聚乙二醇沉淀法5种提取方法。IPGT诱导表达重组猪致病性大肠杆菌（Escherichia coli）毒素STxB蛋白（rSTxB）,与佐剂71VG乳化制备免疫原免疫蛋鸡,利用改良的聚乙二醇沉淀法提取高免卵黄抗体,采用SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,通过Western blot检测卵黄抗体和血清抗体效价。结果表明,辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法提取效率分别为96.00、81.99、155.50、65.34、46.00 mg/mL,其中聚乙二醇沉淀法的提取纯度最高。重组STxB蛋白分子量大小约25 kDa,血清中抗体效价最高达到64 000倍,卵黄抗体最高稀释倍数为16 000倍。综合评估,聚乙二醇的提取法相对较优,且提取的卵黄抗体具有良好的免疫活性。

关键词：卵黄抗体,提取工艺,聚乙二醇沉淀法,STxB蛋白,佐剂

基金资助：湖南省教育厅优秀青年项目（17B041）; 校企合作项目“仔猪腹泻性疾病卵黄抗体制剂的研制”（ZXXQ201701）、“仔猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和致病性大肠杆菌三价抗体的研究”（18H03）; 衡阳师范学院青年英才支持计划专项（16D20）