利用杆状病毒实现外源基因在哺乳动物细胞内表达

来源：湖北农业科学杂志2020年第23期北京时间：

作者：邹桂莲1,2, 罗青平1, 邵华斌1, 温国元1, 杨烨2, 商雨1

单位：1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北重点实验室,武汉 430064; 2.长江大学动物科学学院,湖北 荆州 434025

摘要：杆状病毒是一类专职感染无脊椎动物的病毒,目前表达载体和基因转导载体广泛应用于科学研究和生物医药领域。研究在杆状病毒Bac-to-Bac操作系统基础上将杆状病毒载体改造成能在哺乳动物细胞内表达外源基因的载体。首先,将Bac-to-Bac操作系统中pFastBac-Dual质粒中的PH和p10启动子替换成巨细胞病毒(CMV)启动子和真核生物延伸因子(EF1)基因的启动子;然后将egfp基因和mCherry基因分别插入到EFI启动子和CMV启动子下游;通过转座获得表达egfp和mCherry基因的重组杆状病毒基因组,并转染Sf9细胞获得重组杆状病毒。重组杆状病毒可以在昆虫细胞和哺乳动物细胞内产生绿色荧光和红色荧光,表明以CMV启动子和EF1启动子构建的重组杆状病毒既可以在昆虫细胞内表达外源基因,又可以通过转导在哺乳动物细胞内表达外源基因。该载体可以应用于特殊蛋白的真核表达和基因治疗药物的研究开发。

关键词：杆状病毒,基因表达,哺乳动物细胞

基金资助：国家自然科学基金青年基金项目(31800143);现代农业产业技术体系建设专项(CARS-41-G13);湖北省农业科学院青年基金项目(2018NKYJJ08);湖北省农业科技创新中心项目(2019-620-000-001-17)