一株仔猪产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、耐药性分析及其卵黄抗体的制备

来源：湖北农业科学杂志2023年第4期北京时间：

作者：尹家银, 喻娇, 唐青海, 滕威, 阳坤, 曹馨, 徐晴, 刘博, 李泽

单位：衡阳师范学院生命科学与环境学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室/动物微生物新型检测技术及生物制剂衡阳市重点实验室,湖南 衡阳 421008

摘要：为诊断某规模化养猪场仔猪腹泻病原,并制备其特异性卵黄抗体,采用细菌分离培养、生化试验、16SrRNA PCR鉴定及系统进化树分析、药敏试验等方法对病料进行研究,并利用全菌体灭活和超声波破碎法制备抗原,将其分别与不同佐剂（ISA 71VG、ISA201VG和15AVG）配伍乳化制备疫苗免疫蛋鸡、聚乙二醇法提取高免卵黄抗体、SDS-PAGE电泳和Bradford法鉴定抗体质量及浓度、双向琼脂扩散试验测定抗体效价。结果表明,分离菌株的形状、大小及生化特性均与大肠杆菌相符。分离株的主要毒力基因E.coli-estb和elt基因分别为113、272 bp;分离株elt和estb基因与美国流行毒株如UMNK88处于同一分支,亲缘关系较近;与丹麦株CFSAN018748、瑞士株14OD0056处于不同分支,亲缘关系较远。分离菌株对头孢噻肟、诺氟沙星和复方新诺明敏感,对头孢曲松和多黏菌素B中介,对多西环素、呋喃唑酮以及多种氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物耐药。各组卵黄抗体的重链（约70 ku）和轻链（约25 ku）均明显,纯度高。首免后56 d 0.2%甲醛处理的菌液与ISA 15AVG配伍所致疫苗的卵黄抗体蛋白含量最高（1.462 mg/g卵黄）,超声波破碎处理的菌液与ISA 71VG配合所制疫苗的卵黄抗体蛋白含量次之（1.459 mg/g卵黄）。血清抗体与菌体抗原反应性良好,超声波破碎抗原与ISA 71VG配伍所制疫苗的血清抗体、卵黄抗体效价分别高达1∶16、1∶4。

关键词：猪致病性大肠杆菌（Escherichiacoli）,分离培养,进化分析,耐药性分析,卵黄抗体

基金资助：湖南省教育厅科学研究项目重点项目（21A0442）; 湖南省重点研发计划（2021NK2026）; 湖南省自然科学基金面上项目（2021JJ30060）; 国家级大学创新创业训练项目（202110546001; 〔2020〕1-7）