樱桃病毒A实时荧光定量PCR检测技术的建立与应用

来源：湖北农业科学杂志2023年第7期北京时间：

作者：刘欢, 刘格, 李锐

单位：安康学院现代农业与生物科技学院,陕西 安康 725000

摘要：在樱桃病毒A（CVA） mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特异性强的引物（CVA-dF2、CVA-dR2）,基于SYBR Green I荧光染料建立反转录实时荧光定量PCR检测CVA的方法。该方法重复性好、灵敏度高,无需借助内参基因即可准确检测目的病毒载量,绝对定量标准曲线斜率为-3.574 6,决定系数R2为0.998 6,扩增效率为0.904 4,比常规RT-PCR检测灵敏度高10倍。该方法的建立为CVA定量研究提供了有力工具,可用于果树中CVA批量检测或低丰度病毒样品检测。

关键词：樱桃病毒A（CVA）,反转录实时荧光定量PCR,快速检测

基金资助：国家级大学生创新训练资助项目（202111397011）; 陕西省安康学院高层次人才引进专项资助项目（2020AYQDZR07）; 陕西省安康市科技计划资助项目（AK2020-NY-02）